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Glutathione Magbeads Cat，NO:L00327 说明书编号：TM0260 版本 目录 1.产品描述 2.使用说明书 3.故障排除 4.一般信息 1. 产品描述 1.1 预期用途 金斯瑞的Glutathione MagBeads 非常适合用于小型规模的GST 标签融合蛋白质纯化。 1.2 原理 把含有GST 标签的融合蛋白添加到Glutathione MagBeads 中，在经过短暂的孵育后，重组蛋白质将被吸 附到珠子上。接下来可以使用磁珠分离架把融合蛋白洗脱下来。磁分离技术消除了微管的变化、最大限度地 减少样品的损失和消除繁杂传统离心方法的步骤。 1.3 材料的描述 相关资料 金斯瑞的Glutathione MagBeads 是由还原型谷胱甘肽共价结合在的40 μm 的超顺磁性微球表面组成。磁 珠储存在含有20%乙醇的PBS （PH=7.4 ）中.每1ml （4ml 25%浆体积）磁珠能够吸附超过5-10mg 的GST 标 签融合蛋白质。 Cat. No：L00327 Size:8 ml. 其他所需材料 混合/旋转装置 磁分离架 试管和吸管 缓冲器和解决方案（见下文） 需要的缓冲液 上样Buffer/洗杂Buffer: 1x PBS pH= 7.4 洗脱 Buffer: 10mM GSH （还原型谷胱甘肽）,50mM Tris pH 8.0 2.使用说明书 该说明书以100 μl Glutathione MagBeads 为例，您可根据需要进行放大或者缩小。 2.1 细胞破碎液准备 有许多方法可以从大肠杆菌细胞中制备含有GST 标签的重组蛋白，如高压匀浆或超声破碎。 2.2 使用前准备 1.充分摇匀磁珠。 2.取100 μl 磁珠到一个干净的管中。 3.把管放置在磁力架上收集磁珠，去上清液。 4.加入1ml 洗杂/上样Buffer 充分混匀后，放置在磁力架上收集磁珠，去上清液。重复该次步骤2 次。 2.2 融合蛋白结合 1.用100 μl 的上样Buffer/洗杂Buffer 重新悬浮磁珠。 2.加入含有GST 标签重组蛋白的样品轻轻混匀。 3.放置在振荡器或摇床中在室温下孵育30-60min （如果重组蛋白在室温下不稳定，可以再4 ℃进行）。 4.把孵育后的小管放置在磁力架上收集磁珠，去上清液。如果有需要可保留上清，另作检测。 5.加入1ml 洗杂/上样Buffer 充分混匀后，放置在磁力架上收集磁珠，去上清液。重复该次步骤至少3 次。 2.3 目的蛋白洗脱 1.加入100 μl 洗脱Buffer 重新悬浮磁珠，放置在振荡器上室温震荡5min 2.使用磁力架收集磁珠，把上清转移到另一个干净的管中。 3.重复步骤1 和步骤2. 3. 问题解决方法 通过验证下面的信息来解决您在使用金斯瑞的Ni-charged MagBeads 磁珠时遇到的问题。 问题 可能原因 解决方案 降低培养温度，把 IPTG 的浓度减少到10mM，或者适当减少 融合蛋白是以包涵 诱导时间。 体表达 将表达的包涵体进行适当的变性和重新折叠。 使用的磁珠太少 增加磁珠使用量 上样样品太少 增加上样样品量 融合蛋白没有活性 使用更加温和的破碎方法，如加入溶菌酶破碎细胞，防止目的 GST 融合蛋白的产量很低或者 蛋白变性。 没有目的蛋白。 融合蛋白降解 在细胞破碎液和洗杂Buffer 中加入适量的PMSF。 增加洗脱时间或者增加洗脱液的浓度到 15