HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量论文 【摘要】 目的 建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法 采用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，检测波长是202 nm，流速是1 mL·min-1，柱温是30 ℃。结果 盐酸水苏碱在5.625～28.125 μg内有良好的线性关系，r＝0.9992，回收率为100.3％，RSD为2.4％。结论 本法专属性强.freelm×4.6 mm,.freel），大连依利特公司；流动相：乙腈-水（体积比78∶22）；流速：1 mL·min-1；检测波长：202 nm；柱温：30 ℃；进样量：15 μL。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能达到基线分离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4 000，分离度均是3.6。见图1～3。 图1 盐酸水苏碱对照品HPLC图谱（略） Fig.1 HPLC chromatogram of stachydrine hydrochloride 图2 安坤益母草片HPLC图谱（略） Fig.2 HPLC chromatogram of Ankun Motheratogram of blank control of Ankun Motherg置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125 mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5片（0.25 g/片），除去薄膜衣，研细，精密称取0.25 g，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL乙醇，超声处理30 min，滤过，滤渣及容器用20 mL乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10 mL的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5 000 r/min，5 min），取上清液作为供试品溶液。 2.2.3 盐酸水苏碱空白供试液的制备 按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”项下制备方法制得空白对照供试液。 2.3 标准曲线的制备 精密量取盐酸水苏碱对照品溶液(1.125 mg/mL) 5、7、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=5.89×104x-1.52×104 (r=0.9992)，线性范围：5.625～28.125 μg。 2.4 干扰试验 按“2.1”色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。 2.5 精密度试验 取对照品溶液(1.125 mg/mL) 15 μL，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD＝0.8％。 2.6 稳定性试验 取上述供试品溶液15 μL，分别在0、2、4、8、16、24 h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%(n=6),表明供试品溶液在制备后24 h内测定基本稳定。 2.7 重复性试验 取同一批安坤益母草片(批号6份,按“2.2.2”项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积,计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，表明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。 2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批盐酸水苏碱含量10.8 mg/片)6份，每份取样量为供试品取样量（0.25 g/片）的50％，按“2.2.2”项方法操作，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（1.08 mg/mL）5 mL，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率，结果见表1。 表1 盐酸水苏碱回收率试验结果 (n=6)（略） Tab.1 Recovery of Stachydrine Hydrochloride 2.9 样品测定 取5批（批200705132007051710个样品，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33 mg/片。 3 讨论 盐酸水苏碱结构中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，极性大，在常规的C18柱中难保留［5］。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱分离，最后