RPHPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量论文.docVIP

　　RPHPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量论文 龙荣，祝文兵，彭芳玲，胡勤 【摘要】 目的：建立RPHPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量。方法：采用Hypersil ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm）色谱柱，流动相∶乙腈水（19∶81），流速1.0 mL/min，检测波长283 nm。结果：橙皮苷在进样量为0.6328～5.0624 μg/mL范围内线性关系良好.freelethod for determination of the content of hesperidin in Zhenkeling mixture. Methods: The separation ed on a Hypersil ODS2 (4.6 mm×200 mm, 5 μm) column. The mobile phase L/min, the detecting . Results: The hesperidin had a good linear relation betL (r=0.9999, n=6), the average recovery ethod ple, accurate and repeatable. It can be used for quality control in production of Zhenkeling mixture. ［Key ixture; Hesperidin; RPHPLC; Assay 镇咳灵合剂为我院自制制剂，由板兰根、陈皮、川贝、荆芥、金银花、桔梗、杏仁、地龙、浙贝母等中药组成，具有清热宣肺、止咳祛痰的功效，主治咽喉红肿、痰白稠黄、大便干结之热咳。原质量标准仅有常规检查及鉴别检查，无含量测定。橙皮苷为陈皮中所含有效成分，已有文献报道制剂中橙皮苷的含量测定方法［13］，但对镇咳灵合剂中橙皮苷的含量测定未见报道。本文采用反相高效液相色谱法对镇咳灵合剂中橙皮苷进行含量测定，以控制其内在质量，方法学考察结果令人满意。 1 仪器与试药 Agilent 1100 高效液相色谱仪，Agilent 1100 Vstations工作站（Agilent公司，美国）；梅特勒托利多AB135S电子分析天平（瑞士）；TG16L，每毫升含陈皮药材70 mg，批号：070320、070410、070428、070605、070710；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：乙腈水（19∶81），流速：1.0 mL/min；检测波长：283 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按橙皮苷峰计算不低于2 000。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离（R 1.5）。 2.2 对照品储备液的配制 精密称取橙皮苷对照品7.91 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到浓度为0.3164 mg/mL的橙皮苷对照品溶液，取上述溶液用甲醇稀释成质量浓度为63.28 μg/mL的对照品储备液，备用。 2.3 样品溶液的制备 精密量取1 mL镇咳灵合剂，置于25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min放置至室温，加甲醇稀释至刻度、摇匀、离心（15 000 r/min）10 min，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。 2.4 空白样品及空白样品溶液的制备 除陈皮外，按照处方比例精密称取所需各药材，按镇咳灵合剂的制备工艺制成相应的空白样品。取空白样品1 mL，按样品溶液的制备方法制成空白样品溶液。 2.5 空白干扰试验 按照上述色谱条件，吸取空白样品溶液、对照品溶液、样品溶液，分别注入色谱仪，结果见图1。空白样品溶液中的组分不干扰样品溶液中橙皮苷的测定。橙皮苷的保留时间为12.1 min。 A空白样品 B对照品 C样品 图1 橙皮苷HPLC色谱图（1橙皮苷） 2.6 线性试验 分别精密吸取63.28 μg/mL的对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液10 μL，进样，测定峰面积，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，外标法得橙皮苷标准溶液的线性回归方程为：Y=190.570X2.789（r=0.9999，n=6）。结果表明：橙皮苷浓度在0.6328～5.0624 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。 2.7 精密度试验 精密吸取63.28 μg/mL的对照品储备液0.3 mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为1.8984 μg/mL橙皮苷对照品溶液，取上述溶液10 μL，重