六种食品致病菌的多重PCR检测.pdfVIP

摘要 食品安全是一个越来越引起人们重视的问题，不仅影响到人们的生活、工作 和健康，更是是关系到国计民生的大事。在各种食物中毒中，细菌性食物中毒则 是食物中毒的主要因素，常见的食源性致病菌包括沙门氏菌属、变形杆菌属、副 溶血性弧菌、葡萄球菌及毒素、肉毒梭菌毒素、蜡样芽孢杆菌、韦氏梭菌、弯曲 杆菌、李斯特菌、致病性大肠杆菌、酵米面椰毒假单胞杆菌、结肠炎耶尔森氏菌、 链球菌及志贺氏菌属。本文针对在我国食物中毒中最常见的致病菌进行研究，寻 求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。本文涉及的食源性致病菌有肠毒性大肠 埃希菌(￡coli-ETEC)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus spp)、 霍乱弧菌(Vibriocholerae)等菌属或菌。通过大量的文献参考和实验，我们 经过筛选挑取种或属间特异的序列及相应引物，然后用这些引物对各种细菌的基 因组序列进行PCR扩增检测其特异性，最终决定出用于检测的最优的目的基因及 引物。其中沙门菌和志贺菌的引物为属间通用引物，其余各菌的引物均检测到种 的水平。各菌的目的基因分别为热不稳定肠毒素A亚基基因eltA(肠毒性大肠 肠毒素蛋白A和B基因(霍乱弧菌)、溶血素基因(蜡样芽孢杆菌)。这些目的基 因的引物在一个混合的PCR体系中扩增出各自的目的基因，并且特异性和敏感度 和单独PCR相同，从样品处理开始仅需3—4个小时即可得到结果。用调整好的多 重体系对随机组合的致病菌样品进行扩增，以验证扩增时在较高敏感度的条件下 各目的基因及引物间没有干扰。最后将多重体系付诸实践，检测了21种食品样 品，并对检测出有病原菌的食品进行微生物菌种分离培养鉴定实验，以验证PCR 结果并发现二者检测结果一致。本文既证明了多重PCR检测的可行性，更为食物 中毒诊断及食品检测提供了一种可靠有效方法。将它做成体外基因诊断试剂盒， 将是食物中毒诊断及食品检测的有效工具。本文同时也分析了影响多重扩增的诸 多因素及其相互关系。 关键词： 多重PCR：PCR检测；肠道致病菌：食品安全 Abstract The offood iS moreawaredandmoreseriOUS problem safetybecoming in countries．It’Sassociatedwiththenational many closely development and healthand immediateand treatmentto people’S happiness．The proper whohaveeatencontaminatedfoodiS as patients wellasthefood important beforefood soldoreaten safty are testing bypeople．What’S urgent how nowis todetect bacteriainfoodand pathogenic patients．Todevelop aneffectiveand todetectfoodborn inthis practicalway pathogensstudy， siX offoodborne