分泌抗猪繁殖与呼吸系统综合征病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定.pdfVIP

摘 要 小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术，取脾细胞与NS。骨髓瘤细胞融合， 经间接ELISA筛选，三次有限稀释法克隆，得到一株能稳定分泌抗猪 繁殖与呼吸系统综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株：6PR。经鉴 定，该单抗为IgG。亚类，杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条，杂 交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1：256 克隆抗体与伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应， 显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体。此单克隆 抗体的获得为PRRS病毒的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。 关键词：猪繁殖与呼吸系统综合征病毒 单克隆抗体 间接ELISA 杂交瘤 文献综述 l。猪繁殖与呼吸系统综合征研究进展 1．1猪繁殖与呼吸系统综合征流行概况 and 猪繁殖与呼吸系统综合征(porcinereproductive respiratory 中爆发的一种病毒性传染病，主要造成母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困 难、高死亡率及免疫机能障碍【1】。该病刚流行时，由于病因不明，所 swine 以各个国家和地区的命名不一，最初称猪神秘病(mystery ear (PI湓RS)。1992年欧共体统一将其命名为“猪生殖与呼吸系统综合 征”。该病给世界养猪业造成巨大的经济损失，国际兽医局(OIE) 将该病列为B类传染病f2】。目前，此病已引起全世界本领域科技工作 者的极大关注。 本病自1987年首先在美国发现以来，先后在加拿大、德国、荷 兰、西班牙、比利时、英国、法国、意大利、波兰、丹麦、马耳它等 国存在，现已遍及北美及欧州，亚洲的日本、韩国、菲律宾及我国的 台湾省也有疫情报道。近几年来，随着优良种猪的引进及进出口贸易 的巨增，我国多次在口岸检疫及国内发病猪中检测到PRRS血清阳性 的猪群并从中分离到病毒，从而证实我国也存在本病[31。 1991年初，我国台湾地区也出现此病。1996年我国郭宝清等首 次报道从流产胎儿中分离PRRSV，同时对10个地区10个猪场的血 清学调查中发现PRRS阳性感染率为58．6％；同年简中友等的血清学 调查结果也证实PRRS在我国已经存在并正在流行【2】。1998年下半年 以来，闽西地区不少猪场仔猪突然死亡、蓝耳、体温升高，部分猪场 母猪在短时间流产、死胎和早产，根据这种情况，杨小燕等人对此地 12个猪场20l份样品，从检测结 m清学调查，检NT 区进行PRKS 果来看，血清阳性率很高，都达50％以上【4l。1999年1i月衡阳县农 科所对其县209头疑似PRRS病猪进行抽血调查，阳性率为29．2％HJ。 1998年8月，广西钦州市畜牧兽医站的工作人员对市辖区内的4个 县、区的7个猪场和部分农户共168头猪进行采血，获合格血清133 月对15个养猪场进行p硒选调查，阳性率为61．5％，其中4个养猪 场阳性率为100％tTl1999年11月底青海省畜牧兽医科学院人员对西 宁、大通的部分种猪场进行血清学调查，阳性率为34．55％嗍。1997 年6、7月～1998年。1、2月间，上海市阂行区许多规模化、集约化猪 场相继爆发此病，造成重大经济损失【9】。2003年，广西玉林市对该市 8个规模化猪场进行了血清学检测，结果表明，PRRS在8个猪场普 遍存在，而且阳性率较高，平均为36．7％，最高达53．85％。t691山东 省同年对部分猪场PRRS的流行情况进行了血清学调查，结果表明， 抗体阳性率为23．68％?但山东省胶东地区地处偏远，由于其独特的 地理环境PRRS流行并不普遍。[701今年，一些曾经爆发过该病的猪场 又有PRRS抬头趋势，目前，江南大部分地区种猪场开始爆发PRRS， PRRS