无籽西瓜体细胞胚发生及其细胞学观察.pdfVIP

摘要 本文综述了植物体细胞胚发生的意义、机理及其影响因素等领域的研究进 展，对无籽西瓜体细胚发生的条件和体细胞胚发生过程中的影响因素进行了研 究，并对体细胞胚发生过程进行了细胞学观察，找出了无籽西瓜体细胞胚诱导 的最适条件，为无籽西瓜人工种子的制作奠定了基础，本研究主要结果如下： 1．不同基因型的无籽西瓜体细胞胚发生的难易程度和发生频率有很大差别， 在10个不同基因型中，黑蜜5号、黑蜜2号和郑抗无籽4号较容易诱导出体胚， 其余的7个品种体胚发生率极低，不适宜进行无籽西瓜体胚发生的研究。 2．本试验中子叶是无籽西瓜体细胞胚诱导的最佳外植体，子叶外植体的体胚 发生有直接和间接两种途径，而以间接途径为主；以下胚轴和胚根为外植体时， 则不能诱导体细胞胚的发生。 体胚的发生。它们诱导出的愈伤组织均为非胚性愈伤组织，不利于体胚的诱导。 出胚性愈伤组织和体细胞胚。309·L‘1的蔗糖对体胚诱导效果最佳；外植体前期的 黑暗处理是无籽西瓜体细胞胚诱导过程所必需的条件。 4．不同基本培养基的试验结果表明，MS是无籽西瓜体胚诱导的最适基本培 养基。不同基因型无籽西瓜子叶外植体诱导体细胞胚的最适培养基不同：黑蜜5 号为MS+BA3．0 mg·L-+NAA0．5mg·L-t：黑蜜2号为MS+BA3．0 mg·L～。三 mg·L-t+KTl．0mg·L-+GA31．0 mg·L+l；郑抗无籽4号为MS+BA2．0 个不同品种的体胚诱导率分别为26．3％，25．6％和22．2％。 5．石蜡切片观察表明，胚性愈伤组织的细胞排列紧密、细胞核大，非胚性愈 伤组织的细胞排列疏松、细胞核小。体细胞胚发生从胚性细胞开始，经历早期 原胚、球形胚、心形胚和鱼雷胚几个阶段，最后到成熟子叶胚，整个过程与合 子胚发育过程相似，子叶胚经培养有部分发育成体胚苗。 关键词：无籽西瓜：子叶；体细胞胚发生；细胞学观察 1文献综述 1．1植物体细胞胚胎发生的意义 植物体细胞胚发生是指在离体条件下，植物的体细胞通过与合子胚发生相 类似的途径发育成新个体的过程【I】。体胚在起源上与合子胚不同，但在结构和生 化上都与合子胚类同。它包含以下几个含义：①体细胞胚是组织培养的产物， 只限于在组织培养的范围使用，区别于无融合生殖的胚；②体细胞胚起源于非 合子细胞，区别于合子胚；③体细胞胚的形成经历胚胎发育过程，区别于组织 培养的器官发生中芽与根的分化(2】。与器官发生相比，体细胞胚发生途径产生的 胚状体是两极结构、再生容易，具有繁殖系数大、后代稳定性高等特点。7 织作培养物最早发生体细胞胚以来，人们在大量植物的组织培养、单细胞悬浮 培养、原生质体培养和花粉培养中都观察到体细胞胚胎发生。作为20世纪植物 组织培养中的一个重大突破，体细胞胚胎发生在很多领域都得到了广泛的应用， ①为植物细胞分化、全能性表达及其机理等理论问题研究提供了理想的实验体 系【3】。体细胞胚发生途径是细胞全能性表达最完全的一种方式，它不仅表明植物 体细胞具有全套遗传信息，而且重演了合子胚形态发生的过程。植物体细胞胚 发生的事实，证实了体细胞以至以致小孢子都具有再生植株的全能性。②为基 因工程和细胞工程操作提供了新的方法。通过基因工程可以将外源基因导入植 物细胞基因组中，使外源基因在植物细胞中有效表达和稳定遗传，达到植物的 定向改良，创造新品种。利用体细胞胚性培养物已成功的进行了玉米、大豆【4J 和落叶松等植物的转基因植株。③为种质资源保存、人工种子制作和植株的快 繁奠定了基础【5】。一般认为，通过体细胞胚发生途径形成再生植株是相对稳定的。 理论依据是只有那些未经过畸变的细胞才有可能形成体细胞胚，实现全能性表达 怕J。人工种子的制作，优良种质的保存和无性系繁殖等，正是基于体细胞胚的基 因型与原亲本相同，再生植株的表现型也会相似于亲本这一稳定的遗传特性。 ④通过对体细胞胚发生中细胞突变个体进行选择和育种研究，为新品种的培育 提供了新的方法。因为，体细胞胚的稳定性只是相对的，在其发生过程中同样 出现广泛的变异，以小麦幼胚作为外植体，通过体细胞胚发生途径建立体细胞 无性系，在其后代中出现广泛的变异，包括单基因控制的质量性状变异，如粒 色、蜡性和颖色变异；多