大豆ISSR-PCR反应体系的优化.pdfVIP

第 29卷 第 3期 大 豆 科 学 Vo1．29 No．3 2010拄 6月 SOYBEAN SCIENCE Jun． 2010 大豆 ISSR—PCR反应体系的优化 何海燕，沙 伟，张艳馥 (齐齐哈尔大学 生命科学与工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘 要 ：以黑龙江省大豆为材料 ，利用正交试验设计 ，对大豆 ISSR．PCR反应体系 中的5种主要 因素 (M ‘、引物、 dNTPs、模板 DNA量、Taq酶量)在4个水平上进行体系优化。结果确定了大豆 ISSR—PCR反应 的最佳体系(25 L) 为 ：Mg。浓度 1．85mmol·L～、dNTPs浓度 1．2mmol·L 。‘、引物浓度 1．2txmol·L～、模板 DNA60ng、Taq酶量 0．7U。利用该最佳体系，选取引物855对25份材料进行扩增 ，以验证该体系的稳定性 。建立了适于大豆的 ISSR— PCR反应体系，为利用 ISSR标记技术开展黑龙江省大豆遗传多样性分析提供了依据。 关键词 ：大豆 ；ISSR—PCR；体系优化 中图分类号 ：$565．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—9841(2010)03-0510-04 OptimizationforISSR-PCR ReactionSystem ofSoybean HEHai-yan，SHA Wei，ZHANG Yan—fu (CollegeofLifeScienceandEngineering，QiqiharUniversity，Qiqihar161006，Heilongjiang，China) Abstract：OrthogonaldesignwasadoptedtooptimizeISSR—PCR amplificationsystem onsoybeaninfivefactors(Mg“， dNTPs，primer，DNAtemplateandTaqDNApolymerase)atfourlevelsrespectively，with25soybeangermplasmfrom Hei longjiangProvinceasmateria1．ThemostsuitableISSR—PCRsystemforsoybeanwasestablished，namely25 Lreactionsys‘ tern containing1．85mmo]-L M ，1．2mmo]·L～ dNTPs，60ngDNA template，1．2 I~mol·L～ primer，and0．7U TaqDNA polymerase．Undertheoptimizedreactionconditions，25 soybeanwereeasilyamplifiedwithprimer855．Theresult providedastandardizingprogramfortheanalysisofinterspeciesgeneticdiversityofsoybeanofHeilongjiangProvince． Keywords：Soybeen；ISSR ·PCR；System optimization 大豆是重要的油料作物和粮食作物，是世界上食 带通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳得以 用油和植物蛋白的主要来源。东北是中国大豆的主 分辨 。ISSR分子标记通常为显性标记 ，呈孟德尔 产区，经过长期 自然选择和人工选择，形成了种类丰 式遗传 ，具有技术简便快速 、稳定性强、DNA多态性 富的大豆种质资源，共有大豆种质资源3226份，占全 高等优点。ISSR技术是基于 PCR的一种分子标记 国大豆种质资源的 13％ 。因此 ，东北地 区大豆种 技术，其扩增结果易受 Mg“、引物、dNTPs、Taq酶 、 质资源的利用和保护对全国大豆市场供求具有重要 模板DNA等因子浓度的影响，对于不同的反应体系 的影响。培育高产 、优质、抗病虫、抗逆的优 良新品种 和扩增程序 ，ISSR的结果是不同的。因此 ，在用该 仍是首要 目标 ，而种质资源遗传多样性保护和利用的 技术进行大豆遗传多样性检测之前，应先建立一个