雷蒙德氏棉叶绿体基因组 Fosmid 文库构建.pdfVIP

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2017-06-13 发布于山东
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雷蒙德氏棉叶绿体基因组 Fosmid 文库构建.pdf

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CottonScience 棉花学报 CottonScience 201I，23(1)：lo~14 雷蒙德氏棉叶绿体基因组Fosmid文库构建李朋波1，．，薛龙飞，，王彦霞-。张曦1，李召虎1，华金平卜 (1．中国农业大学农学与生物技术学院／作物遗传改良北京市重点实验室／作物基因组学与遗传改良农业部重点开放实验室／杂种优势研究与利用教育部重点实验室，北京100193；2．山西省农业科学院棉花研究所，运城044000) 摘要：采用高盐、低pH值法提取雷蒙德氏棉叶绿体DNA；通过物理剪切法获得随机断裂的DNA片段；剪切片段末端、补平修饰后与pCC!FOS载体连接；用噬菌体包装蛋白包装重组DNA，侵染大肠杆菌EPl300，构建了雷蒙德氏棉叶绿体基因组文库。对于叶绿体DNA剪切，以1mL注射器中等速度吸打18次为最佳参数。叶绿体基因组Fosmid文库滴度为lxlera·mLl，插入片段大小平均为38kb，最终筛选出39个克隆用于后续研究，覆盖叶绿体基因组9．2倍。以叶绿体特异标记筛选出能够覆盖雷蒙德氏棉叶绿体金基因组的6个克隆： F66，F46，F28，F8，F55和F3，为基因组结构和功能基因分析提供了良好的基础。关键词：雷蒙德氏棉；叶绿体DNA；Fosmid文库文献标识码：A 中图分类号：Q812：$562 文章编号：1002．7807(20l1)01．0010．05 of in ConstructionaFosmid of Genome raimondii LibraryChloroplast Gossypium LIPeng—bel’2，XUELong—feil，WANGYan—xial，ZHANGXil，LIZhao-hul，HUAJin-pin91+ of Genetic (1．CollegeofAgronomyBiotechnology,ChinaAgriculturalUnivemity／Be巧ingKeyLaboratoryCrop Improve- Genetic andGenome Heterosis ment／KeyLaboratory Improvement ofMinistry ofCrop ofAghcalture／KeyLaboratoryofCrop andUtilization Research ofMinistry Institute,Shanxi ofEducation，Beijing100193，Ch／na；2．Cotton AcademyofAgricultural Sciences,Yuncheng,Shanxi044000，China) Abstract：Inthis FosmidofG．raimondii wasconstructed．TheDNAwasisolated paper,a library genome chloroplast chloroplast ionic andlowbuffermethod．TheDNAwas shearedandclonedinto 1FOSvector，Recombi- byhigll strengt