黄瓜Rubisco 活化酶基因CsRCA 表达载体构建与遗传转化.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （5 ）：869 –878 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 黄瓜 Rubisco 活化酶基因 CsRCA 表达载体构建 与遗传转化 1 2 1 1 1,* 刘培培 ，姜振升 ，王美玲 ，毕焕改 ，艾希珍 1 2 （山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ； 山东金正大生态工程股份 有限公司，山东临沂 276700 ） 摘 要：核酮糖–1,5 –二磷酸羧化/加氧酶（Rubisco ）是光合碳循环中的关键酶，为了探明其在植 物体内的活化机制，用农杆菌介导法将 Rubisco 活化酶（RCA ）基因 CsRCA 导入黄瓜，分别用 PCR 、real-time PCR 和 Western 杂交法进行分子检测，分析转基因植株的表达量。酶切鉴定结果显示，CsRCA 正向插入 植物表达载体pCAMBIA1301 的CaMV 35S 启动子和NOS 终止子之间，成功构建 CsRCA 的正义表达载体。 将 pCAMBIA1301-CsRCA 导入黄瓜自交系‘08-1 ’，获得7 株转基因植株，拷贝数均为 2 （非转基因植株 的拷贝数为 1），转化率约为 3.5% 。表达分析结果表明，7 株 T0 代转基因植株叶片的 CsRCA mRNA 表达 量为野生型（WT ）的 1 ~ 1.98 倍，在蛋白水平的表达信号显著强于 WT 。T1 代转基因植株的叶片叶绿素 和类胡萝卜素含量、光合速率（Pn ）及可溶性糖和淀粉含量均显著高于WT 。研究结果表明，利用农杆菌 介导法获得了稳定遗传的黄瓜 CsRCA 转基因植株，CsRCA 过量表达能显著提高黄瓜叶片的 Pn ，增加干物 质积累。 关键词：黄瓜；核酮糖–1,5 –二磷酸羧化/加氧酶（Rubisco ）；Rubisco 活化酶（RCA ）；遗传转化； 过量表达 中图分类号：S 642.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）05-0869-10 Expression Vector Construction of Rubisco Activase Gene CsRCA and Genetic Transformation to Cucumber 1 2 1 1 1,* LIU Pei-pei ，JIANG Zhen-sheng ，WANG Mei-ling ，BI Huan-gai ，and AI Xi-zhen 1 （College of Horticulture Science and Engineering，State Key Laboratory of Crop Biology ，Shandong Agricultural 2 University，Tai’an，Shandong 271018 ，China；Shandong Kingenta Ecological Engineering Incorporated Company ，Linyi ， Shandong 276700 ，China） Abstract ：Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/xygenase （Rubisco ）is a key