中药微生态制剂“毒感清”对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响.docVIP

中药微生态制剂“毒感清”对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响 摘要：通过点跟、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫La Sota株，感染8 h后在饮水中添加中药微生态制剂“毒感清”，每瓶兑水250斤，每天集中饮用2-3个小时。于感染后第7天采集气管组织，制备病理切片。结果显示，连续3 d以上饮用“毒感清”的试验鸡，其气管的病理损伤可得到明显改善；检测饮用“毒感清”后试验鸡的新城疫抗体效价，结果表明口服高剂量的“毒感清”可明显下调新城疫抗体的滴度。 关键词：中药微生态制剂、中药、益生素、微生态、“毒感清”、新城疫、口服、组织病理变化、Hl抗体滴度 “毒感清”是优选特定中药，通过乳酸菌进行发酵，具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫等作用的一类中药微生态制剂。中国科学院微生物研究所最早发现中药通过乳酸菌进行发酵，可以提高中药功效4-28倍，抑制病毒在细胞内的复制，具有抑制病毒和免疫调节等多种功效，能有效地遏制病毒侵袭和感染的发生，抑制肿瘤细胞生长，清除早期恶变细胞。由于“毒感清”具有广谱、高效抗病毒功能，且对机体免疫系统起关键调节作用，成为当今免疫学、遗传学和微生态学研究最为活跃的领域之一。目前，在兽医临床上，“毒感清”已广泛应用于多种疾病的预防和治疗。 本试验利用毕赤酵母表达系统表达，且证实在机体内有较好抗病毒效果“毒感清”，进行了口服“毒感清”对鸡新城疫人工感染的治疗试验和对疫苗免疫的影响试验以检验其在鸡体内的抗病毒能力和免疫调节能力。 1材料与方法 1．1试验动物45日龄SPF鸡，由安徽省农业科学院家禽研究所SPF鸡场提供。 1．2病毒毒株鸡新城疫病毒疫苗株La Sota，由安徽省禽病诊断与免疫重点实验室保存。 1．3 “毒感清”由合肥太阳雨生物工程有限公司生产，为重组毕赤酵母表达产物，经离子交换、凝胶过滤层析纯化制得，微量细胞病变抑制法(CEF—VSV系统)测定其活性为5．7×106 U／mL。 1．4 口服“毒感清”对鸡新城疫弱毒株感染的治疗。 取45日龄SPF鸡60只，随机分成6组，每组10只，第1至4组为试验组，第5组为病毒对照组，第6组为空白对照组。第1至5组通过点眼、滴鼻方式感染新城疫弱毒La Sota株，每只鸡感染量为1×106 EID。。。第1至4组分别于攻毒后8 h左右，开始饮用添加“毒感清”的纯净水，分别饮用1、2、3、5 d，其他组饮用纯净水，每组200 mL，每瓶兑水500斤。感染后7d各试验组随机抽取4只鸡，采集气管组织，4％多聚甲醛固定，制备组织病理切片，确定口服治疗效果。 1．5 “毒感清”对新城疫HI抗体滴度的影响。 于攻毒前将各组试验鸡随机抽取1只采血，自第1次饮用“毒感清”后，每周采血1次，直至感染后第4周，分离血清，按常规方法进行HI试验，测定血清中新城疫抗体效价，研究“毒感清”对鸡群新城疫抗体滴度的影响。 2 结果 2．1 “毒感清”对新城疫感染的疗效。 气管的组织病理切片显示，感染新城疫La Sota株7 d后，试验组鸡未出现明显的临床症状，但病毒对照组鸡的气管组织已发生了明显的病理变化，如气管环出血，纤毛脱落，气管上皮明显增厚。有大量的淋巴细胞浸润(图1A)。但攻毒后饮水中含“毒感清”的试验鸡，炎症反应得到明显改善，其中，连续3 d以上饮用“毒感清”的试验组效果最佳，气管上皮可见完整的具纤毛的杯状细胞，无淋巴细胞浸润(图1B)，与正常的气管组织(图1C)相似。 试验证明，大剂量的“毒感清”愈合新城疫病毒造成的病理损伤。 图1气管组织切片(苏木精～曙红染色，400×) 注：A，攻毒对照组鸡的气管组织切片；B，连续3 d “毒感清”鸡的气管组织切片IC，空白对照组鸡的气管组织切片。 2．2 “毒感清”对鸡新城疫疫苗免疫的影响。 经弱毒苗La Sota株免疫后，各组鸡血清HI抗体滴度在1周内开始升高，至第3周达到最高，此后呈下降趋势。“毒感清”的免疫调节作用在饮用后1周即明显表现出来。与对照组(第5组)相比，连续2 d以上饮用含“毒感清”的试验鸡，新城疫抗体滴度均有所下降，而且饮用天数越多，抗体滴度下降越明显，这一现象在第4组表现最为明显，到4周时，其抗体滴度与对照组相差达3个滴度，而只饮用1 d的第1组，其抗体水平在4周后与对照组相差无几。结果见表1和图2。试验结果表明，“毒感清”同样能对活病毒有干扰和抑制作用，引起抗体滴度的下降。 表1 “毒感清”对新城疫抗体滴度的影响 组别 血清HI抗体效价平均值（log2） 免疫前 第1周 第2周 第3周 第4周 第1组 3.0 6.3 8.0 8.5 7.8 第2组 3.0 6.1 7.2 7.8 7.0 第3组 3.0 5.3 6.0 6.5 5.5 第4组 3.0 4.5 5.5 6.2