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DNA稀碱快提取实验毕业论文答辩ppt模板
指导教师:XX
糯玉米干种子DNA快速提取及鉴定
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目录
研究背景与目的
实验材料
实验方法
结果与分析
DNA质量检测
同一引物不同品种的扩增图谱
不同引物同一品种的扩增图谱
结论与讨论
致谢
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背景:
1、糯玉米营养价值和保健作用都很高;
2、分子育种是常规育种的重要辅助手段。
目的:
1、DNA的快速有效提取,是分子标记辅助育种的重要前提。
2、本文在前人研究的基础上,以稀碱(0.1mol/L的NaOH溶液)为提取液,快速提取糯玉米基因组DNA,并对其进行了检测。
研究背景与目的
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材料与试剂
实验材料:
糯玉米N1、N6、 N7和N8四个品种,由安徽科技学院玉米育种工程中心提供。
主要试剂:
①提取液:0.1mol/L NaOH溶液②电泳缓冲液:5×TBE(Tris-硼酸)③TE缓冲液④琼脂糖⑤无水乙醇(使用冰的沉淀DNA效果较好)⑥75%乙醇
PCR反应试剂:随机引物,dNTP(10mM),TagDNA聚合酶(5U/μL),MgCl2(25mM),10×Buffer
主要仪器:
1.5ml离心管,烧杯,移液器,BIO-RAD凝胶成像系统,高速冷冻离心机,电泳仪、琼脂糖水平电泳槽,电子分析天平,PCR仪,等等。
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实验方法
1)取每个品种干种子一粒放入离心管内,捣碎,加入300μL0.1mol/L的NaOH溶液研磨至匀浆;
2)8000r/min转速,离心6分钟;
3)取上清液,加入到事先装有500μL无水冰乙醇的离心管中,上下轻轻颠倒几次,片刻可看到白色絮状物;
4)8000r/min转速离心6分钟;
5)倒去液体,白色沉淀物用75%酒精洗1-2次,倒去酒精;
6)晾干,加入50μL的TE溶液,使其充分溶解。
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结果及分析(1)-DNA质量检测
图1 糯玉米干种子DNA琼脂糖凝胶电泳图
注:1:品种N1;2:品种N6;3:品种N7;4:品种N8
☞从图1中可以看出,所提取糯玉米基因组DNA质量较好,带型完整清晰,未发生降解现象。但DNA浓度上有所差异,在四个品种中N6的DNA浓度较低。
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结果及分析(2)-RAPD扩增检测
图2 同一引物(引物6 )不同品种RAPD扩增的电泳图谱
注:1: 品种N1;2:品种N6;3: 品种N7;4: 品种N8
☞从图2中可以看出引物6在四个样品中均能扩增出大小不同的若干个带型,表明用稀碱法提取四个糯玉米品种的DNA,可以应用在RAPD分子标记中。
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结果及分析(3)-RAPD扩增检测
☞从图3中可以看出,在品种N1提取的DNA溶液中,引物8、25、43、57、85和92六个引物能够扩增出大小不同的带型;而引物42、59、73三引物在品种N1中没有扩增出带型;表明引物42、59、73品种在N1中没有特异性。
图3 同一品种(N1)不同引物RAPD扩增电泳图谱
注:1: 引物8; 2: 引物25;3: 引物42;4: 引物43;
5: 引物:57;6: 引物59;7: 引物73;8: 引物85;9:引物92
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结论及讨论
可行性:
通过实验,该方法能够快速得到DNA,并可以进行RAPD扩增鉴定。表明,糯玉米种子快速提取的方法是可行的。
比较:与以往CTA
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