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不同提取方法对油菜花粉类脂物质的影响 潘建国1郑尧隆2卢占列1李立群2 (1．广州市宝生园有限公司，广州510100：2．广州市蜂产品研究所，广州510403) 摘要酶解破壁法与索氏法提取油菜花粉脂质和脂肪酸的变化情况是此研究的主要目的之 一。对酶解破壁法与索氏法提取油菜花粉的SFAs、SUFAs、PUFAs的变化进行了比较，酶 升为9．76。 关键词花粉；脂肪酸；索氏提取法：酶解破壁法 一、国内外目前对蜜源花粉中PUFAs的研究现状及趋势 目前，在一些发达国家如日本，深海鱼油和大麦胚芽油等富含PUFAs的保健食品深 受欢迎。在美国，尽管FDA尚未批准PUFAs类的精制鱼油产品，但这些健康食品可以广 泛的购买到。在英国，高含量的EPA制剂近来已被批准临床应用。然而，美中不足的是， 国内外研究和利用的不饱和脂肪酸主要是来源于是鱼油、藻类、植物性油料作物等。很显 然，在目前世界人口日益增多，粮食资源不充分的情况下，如何寻找新的非粮食类的资源 来发展这·特殊功能营养素—_PUFAs，是关乎世界农业未来发展的战略问题。 ，!目前，国内外在对花粉从全球来看，世界人口不断增加，而世界上可耕地差不多已 经被开垦耕种。在不饱和脂肪酸生产方面，节约农业资源，寻找新的开发资源是顺应时代 提取的农产品资源。但是，从花粉中提取PUFAs在国际上目前还处于～个非常薄弱的领 域，国内外现有的文献也基本停留在分析花粉脂肪酸的种类和含量为主，并未涉及提取优 化工艺路线的研究，距离工业化生产的路程非常遥远。本项目对花粉中PUFA,s的不同方 法提取的研究具有理论价值和实际意义。 2．1原料的选择 经过以前对各种花粉中所含的PUFAs的普查和分析，从原料供应的稳定性和经济性 L．)作为本次研究的材料。 出发综合考虑，选择江西南昌产油菜花粉(Brassicanapus 2．2索氏提取法测油菜花粉脂质含量 ， 纸筒内。将滤纸筒放入索氏抽提器内，连接已干燥至恒重的脂肪接受瓶，由冷凝器上端加 使混合溶剂不断的回流提取，6h后取下接受瓶，回收混合溶剂，待接受瓶内溶剂剩1-2ml 时，在水浴上蒸干，再于60。C烘箱中烘干，取出放干燥器内冷却30min，称重，并重复 操作至恒重。精密称出接受瓶与脂质共重，减去接受瓶重量，即为花粉脂质含量。若需进 存时间不宜超过三天。用索氏提取法测得油菜花粉脂质含量为，8．5％。 2．3酶解破壁法提高油菜花粉脂质得率的研究 2．3．1酶解破壁法原理 利用酶(多数情况使用纤维素酶如绿色木酶等)可以降解植物细胞壁的纤维素骨架、崩 溃植物细胞壁，使植物细胞内有效成分充分游离，提高细胞内物质的提取率。在用花粉进 行生物工程研究时，常常要涉及到花粉的破壁，然后进行花粉原生质体组织培养等。这种 破壁就常使用纤维素酶，有时针对花粉的不同品种还结合果胶酶或蛋白水解酶等，但成本 高昂，一般只限于实验室而实际应用很少。此研究中参考黄俊辉、刘志强等文献，采用纤 维素酶中的绿色木酶对油菜花粉进行破壁。 2．3．2油菜花粉的前处理及酶解条件 油菜花粉的粉碎处理：这是酶解前纤维素材料预处理的常用方法，它有利于增加底物 浓度，增大酶作用表面积，提高酶作用的效率。挑选出颗粒完整的油菜花粉，置于60℃ 烘箱中烘干，控制水分在5％以下，用破碎机破碎，过40目筛。 酶水解处理：根据其它材料的经验，植物细胞酶解破壁一般有四个因素最为重要，即 加酶量、酶解温度、pH和酶解时间。本研究也借鉴这一成果。具体操作是：粉碎后的花 粉，按实验规定的酶／花粉(重量比％，下同)加入纤维素酶，在指定的温度、pH、时间 条件下进行酶解反应。以未加酶相同条件下做空白实验。酶解破壁处理后的花粉经60℃ 烘箱中烘干除去水分，用索氏抽提法提取脂质。 为方便起见，本研究多数地方把此法简称酶解破壁法。 2．3．3酶解破壁法各单因素对油菜花粉脂质得率的影响 2．3．3．1加酶量对油菜花粉脂质得率的影响 在四个重要的酶解破壁因素中，即加酶量、酶解温度、pH和酶解时间，根据其它材 料经验，加酶量是最重要的酶解破壁因素，因此首先研究此因素。参考其它材料报道，其 它三个因素选择反应温度50℃，pH值4．5，酶处理时间5h。以上海伯奥生物科技有限公 司生产的纤维素酶(绿色木酶)为水解酶，在加酶量为02％～120