棉花耐盐基因表达谱与耐盐相关基因的克隆研究.pdfVIP

中国棉花学会2010年年会论文正编159 棉花耐盐基因表达谱与耐盐相关基因的克隆研究 叶武威。王俊娟．宋丽艳。樊保香，王德龙，张丽娜 (中国农业科学院棉花研究所／农业部棉花遗传改良重点实验室／ 河南省棉花生物学重点实验室，安阳455000) 全世界盐碱地面积约占农田灌溉面积的三分之一以上。我国现有盐渍土面积为34．7× 106hm2。且尚有17．33×106hm2左右潜在盐渍化土壤，面积仅次于澳大利亚、墨西哥、阿根廷。这些 盐碱地多分布于华北、疆北、东北和东部滨海地带，严重威胁着我国主产棉区的生态环境，阻碍着棉花 生产。棉花作为盐碱地的先锋作物，其耐盐性较粮食作物稍强。较低浓度的盐分(土壤含盐量0．2％ 以下)有利于棉花出苗、生长、提高产量和品质。但是，盐分浓度大于0．2％时，就会对棉花产生离子 毒害和渗透胁迫等。盐分超过临界浓度，随着盐浓度的升高，将明显影响棉花的生理机能、物质代谢， 从而抑制棉花的生长发育，导致产量下降以及品质改变。中国每年因此造成的棉花损失高达3万～ 3．5万kg皮棉，开展棉花耐盐性有关的研究可以有效降低上述损失，为我国皮棉总产再上一个台阶 做出贡献。 第一．利用代表广泛的60份种质(系)研究了耐盐性骨干品种的血缘组成和耐盐性的主要相关因 子，明确了棉花耐盐骨干品种的基础种质及其亲源关系。采用聚类分析的方法，对我国具代表性的 60份棉花耐盐骨干种质进行系谱分析。结果表明：耐盐骨干品种主要来自岱字棉、乌干达棉、金字 棉、苏联棉系4个基础种质，耐盐材料中88．33％含有岱字棉血统，81．67％含有乌干达棉血统， 78．33％含有金字棉血统，65．00％含有苏联棉血统。斯字棉、福字棉、爱字棉的血统所含的种质比极 少。当前，我国陆地棉的耐盐性水平不高，而且育种水平一直难以有较大的突破。究其原因，可以归 纳为两方面：一方面是陆地棉基础种质如岱字棉、乌干达棉、金字棉的衍生系耐盐性较差造成后代品 种(系)的耐盐性不高；另一方面是基础种质过于集中，60份中含有岱字棉、乌干达棉、金字棉、苏联棉 系等4个基础种质的材料占了57份，达到95．00％，这造成了我国耐盐品种的遗传基础相当狭窄，形 成了棉花品种的耐盐性难以突破的困境。 第二，研究了盐胁迫下棉花耐盐相关基因的差异表达。利用Oligo芯片检测技术，对不同耐盐性 的中棉所12(不耐盐)和中9806(耐盐)在盐胁迫下的基因差异表达进行了研究。结果表明：在盐胁迫 下，不耐盐的材料有1644个基因差异表达，耐盐材料有817个基因差异表达。不耐盐的材料差异表 达的基因数量基本上是耐盐材料的2倍。从基因表达量来讲，耐盐性差异表达基因可以分为5类；A 类基因32个，在不耐盐材料中无差异表达，在耐盐材料中具差异性表达的上调基因，这类基因主要是 表达蛋白等相关基因；B类基因548个，在耐盐材料中无差异性表达，而在不耐盐材料中具差异性表 达的上调基因，这类基因主要是锌指蛋白相关基因和其它蛋白相关基因；C类基因176个，在不耐盐 材料中无差异性表达，而在耐盐材料中具差异性表达的下调基因，这类基因主要含有激素表达相关基 因、毒性降解酶基因等；D类基因487个，在耐盐材料中无差异性表达，而在不耐盐材料中具差异性表 达的下调基因，这类基因主要含有衰老、生长快慢相关基因、富集蛋白基因等；E类基因609个，在不 耐盐材料和耐盐材料中均具差异性表达的下调基因。这类基因主要是调渗蛋白、通道蛋白、部份表达 蛋白等相关基因。 从基因编码蛋白的功能来分，盐胁迫后棉花差异表达基因分为蛋白质表达基因和蛋白质调节基 因两类。蛋白质表达基因包括渗透调节蛋白等表达基因和毒性降解酶基因两类，蛋白质调节基因包 括转录因子和信号传导蛋白两类。所以，棉花耐盐性差异表达基因依编码的蛋白功能可分为以下4 类：(1)渗透调节蛋白表达基因96个(其中上调基因52个，下调基因44个)，主要是蛋白表达相关基 160中国棉花学会2010年年会论文汇编 基因为8个，下调基因为90个)，这类基因主要包括感应和转导胁迫信号的基因以及在信号转导中起 重要作用的基因。 和§腺苷甲硫氨酸合成酶基因，分别命名为GhVP和GhSAMS。并对这两个基因进行序列特征和生 PCR分析，并构建了原核表达 物信息学分析；同时，在0．4％的盐量胁迫法处理下，进行了Rea