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影响微生物生长的理化因素 一、温度 1、干热法： 1） 焚烧：适用于无经济价值的 2）干烤：利用热空气灭菌 用法：160℃,2小时 适用于玻璃器皿及耐热的器皿 特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。 所以温度高、时间长。 2、湿热法：利用饱和热蒸汽灭菌 特点：温度低、时间短、灭菌效果好 原因：1) 菌体内含水量越高，则凝固温度越低； 2) 蒸汽冷凝会放出潜热； 3) 饱和水蒸汽穿透力强； 4) 湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定性，主要破坏氢键结构。 方法：煮沸法 巴斯德消毒法 间歇灭菌法 高压蒸汽灭菌 1）煮沸消毒法 方法：水煮100℃—30min 适用：注射器、解剖用具等。可杀死所有营养体和部分芽孢。 2)巴斯德消毒法： 方法： 65℃ or 71℃—15min 135 ℃ or 150 ℃ —2sec 适用：牛奶、饮料等。不破坏营养物质，并杀死病原菌。 3）间歇蒸汽灭菌法：方法： 37 ℃培养 37 ℃培养 100℃-30min 100℃-30min 100℃-30min 用水蒸汽把培养基加热到100℃，分几次蒸煮以达到 彻底灭菌又保护营养成分的目的。 适用：营养含量高、不适于用高压蒸汽灭菌的特殊培养基、药品的灭菌。此法麻烦、周期长 4）高压蒸汽灭菌法： 利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到高温灭菌目的的方法。 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）-20min。 适用：耐高温物品。 注意事项：排净冷空气；灭菌终了，缓慢降压；灭菌结束，趁热取出物品。 影响灭菌的因素： 不同菌种、不同菌龄对热的敏感性不同； 培养基成分； 灭菌时间的对数与灭菌绝对温度的倒数呈线性关系，即：灭菌温度越高，时间越短； 菌浓度对灭菌时间有影响。 高压蒸汽灭菌对培养基的影响: 会产生混浊或形成不溶性沉淀 改变某些营养成分： 1)低pH下，糖类、琼脂发生水解； 2）PO4-3存在，葡萄糖生成酮糖，菌不利用； 3）色深：还原糖羧基与蛋白质、氨基酸等在高温下发生maillard反应，使糖、蛋白质等失去营养。形成有害物质，抑制微生物生长； pH下降（通常下降0.2）； 改变培养基的体积与浓度。 二、氢离子浓度（pH） （一）对微生物生长的影响 1. pH影响物质吸收： 影响膜表面电荷及膜的通透性，进而影响膜结构。 2. 改变酶活、酶促反应的速率及代谢途径： 如：酵母菌在pH4.5-5产乙醇，在 pH6.5以上产甘油、醋酸 3. 改变环境中营养物质的可给性或产生毒物质。 （二) 不同微生物对pH要求不同 细 菌：pH 7.2 -7 .6酵母、霉菌: pH 5 -6放线菌: pH 7.6 -8 (三) pH的杀菌作用 1. 酸:无机酸:与H+浓度成正比。 有机酸:与不电离的部分成正比,故有时有机酸的灭菌效果无机酸。 2. 碱: 强碱造成蛋白质、核酸大分子变性水解，使菌死亡。 三、氧 (一）氧在体内易转变为超氧阴离子自由基： 1、形成：为非酶促方式： 2、特点：▲ 既有分子性质，又有离子性质； ▲ 反应力极强，性质极不稳定； ▲ 可破坏膜和重要生物大分子，亦可产生其它毒性的活性氧化物。 （二）O2·驱除机制： 1、SOD（超氧化物歧化酶）的作用； 2、过氧化氢酶的作用—好氧菌； 过氧化物酶的作用—耐氧菌； 各类菌所含对氧解毒酶 专性好氧菌 SOD，过氧化氢酶 兼性厌氧菌 SOD， 过氧化氢酶 专性厌氧菌 二种酶均无 微好氧菌 少量SOD 耐氧菌 SOD， 过氧化物酶 四、辐射 （一）电离辐射：χ、γ、β射线 。 原理 ：引起水和其他物质的电离，产生游离基，破坏DNA，从而造成细胞损伤。 特点；穿透力强，无专一性，对所有生物均有杀伤作用；制造昂贵；难以控制。 适用：菌种诱变。 非电离辐射：（ＵＶ） 方法：在波长265-266nm处，杀菌力最强。 原理：1）作用于DNA ，使同链DNA相邻嘧啶间形成嘧啶二聚体，引起DNA结构变形，阻碍正常的碱基配对，从而造成菌的变异或死亡。（光复活酶可修复） 2）有氧时产生过氧化氢，强氧化杀菌。 适用：空气、水的消毒杀菌（紫外灯- 低压汞气灯）。 特点：穿透力差。 五、干燥 干燥时，微生物代谢立即停止、死亡。 机理：细胞内蛋白质变性、盐类浓缩。 影响干燥致死的因素： 1、微生物种类：有芽孢、荚膜、孢子的菌对干燥 有抗性，TB、链球菌孢子的菌对干燥