免疫磁珠分离和流式细胞仪分选纯化外周血CD34+.PDFVIP

246 　临床检验杂志 2004 年第 22 卷第 4 期 　Chinese Journal of Clinical Laboratory Science ,2004 ,Vol22 ,No4 　 ( ) 文章编号 :1001764X 2004　　　中图分类号 :R331. 1 　　　文献标识码 :A ·论著· 免疫磁珠分离及流式细胞仪分选纯化外周血 CD34 + / CD90 + 干细胞 ( ) 徐勇 ,霍梅 暨南大学医学院附二院/ 深圳市人民医院 ,深圳 518020 摘要 : 目的 　建立人外周血 CD34 + 细胞及其亚群的纯化分离方法。方法 　用干细胞采集仪收集了 3 例病人的外周血干细胞 , 应用免疫磁珠分离柱快速分离其中的 CD34 + 细胞 ,随后采用分选型 EPICS Elite 流式细胞仪进一步分选出 CD34 + / CD90 + 双阳 性早期造血干细胞。结果 　免疫磁珠分离纯化后 CD34 + 干细胞的纯度可达 83 %～95 % , 回收率54 %～71 % ,活细胞率 95 % 。 流式细胞仪分选后的 CD34 + / CD90 + 细胞纯度可达 90 %以上, 回收率在40 %～50 % ,生存率 95 % 。起始标本中CD34 + 细胞含 量越高 ,纯化所得到的干细胞纯度和回收率越高。两种纯化后的干细胞在形态学上有明显的不同。结论 　联合应用免疫磁 珠分离和流式细胞仪分选 ,可以较高的回收率快速纯化高纯度的 CD34 + 细胞及其亚群。 关键词 :造血干细胞 ;细胞分离 ;流式细胞仪 ;细胞分选 　　干细胞纯化和培养是研究干细胞各种生物学特 采集后的干细胞先进行溶血处理 ,然后用预冷的冲 ( ) 性的基本手段 ,有潜在的临床治疗价值。如何获得 洗液 含 10 g/ L 人血清白蛋白的 PBS 洗涤 3 次 ;30 真正具有高度自我复制能力的干细胞是一个难题。 μ m 的尼龙滤网过滤除去小的凝块 ,再用 PBS 缓冲液 + 8 μ 目前认为 CD34 细胞是比较早期的干细胞 , 但 洗涤 1 次 ;最后以 300 l/ 10 个细胞重悬。 + + 8 CD34 细胞是异质性的 , 多能干细胞只占其中一小 CD34 干细胞的磁性标记 :按 100 μ 个细胞 l/ 10 部分 , 更原始的部分应该富含在 CD34 + / CD90 + 、 的量加入 FcR 阻断试剂以阻断非特异性结合或 Fc CD34 + / CD38 - 和 CD34 + / AC133 + 等部分[1 ] 。纯化出 受体介导的抗 CD34 + 微磁珠与非靶细胞的结合 ;按 6 + + 这些更原始的部分进行体外培养 ,才能更加真实地