实验6淀粉酶的定化及淀粉水解作用的检测.pptVIP

三、 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 实验目的 1、制备固定化α-淀粉酶 2、进行淀粉水解的测定 补充：固定化细胞的优点： （1）不需要进行酶的分离纯化，减少起始投资。 （2）酶的回收率高，酶在原有的细胞环境下，稳定性更高。 （3）细胞保持生命活动状态，细胞中的辅助因子可自动再生。 （4）细胞含有多酶体系。可催化一系列的反应。 （5）反应中抗污染能力强。 * * 第二部分 :酶的应用 1、酶制剂的概念和种类 酶制剂 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂 2、酶的生产 ①提取法 定义：采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来 优点： 简单易行，在动植物或微生物资源丰富的地区具有应用价值 实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中提取出菠萝蛋白酶 缺点： 要有充足的原材料，广泛应用受到限制 ②发酵法——常用方法 定义：通过微生物发酵获得所需要的酶。 如果是胞外酶，可以从发酵液中直接提取；如果是细胞内酶，则可将细胞弄碎再经过提取纯化而得到。 易培养、繁殖速度快、便于大规模生产。 优点： 提取方式： 在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂，说明酶制剂使用有很多优点，你能思考后举出一些吗？ 催化效率高、低能耗、低污染等。 酶制剂的使用有缺点吗？ 3、酶制剂的优点 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活； 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 3、反应后会混在产物中，可能影响产品质量。(难分离） 4、酶制剂的缺点 2、固定化酶技术的优点： （1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离； （2）固定在载体上的酶可以被反复利用。 二、固定化酶 固定化酶：就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 吸附法、 共价偶联法 交联法、 包埋法、 3.固定化酶方法 设备及用品:5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支 材料: 1. α-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mga-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min. 2.可溶性淀粉溶液:取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀. 3. 5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中 实验原理：本实验是用吸附法将α -淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成 淀粉 α-淀粉酶 糊精 β淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为 50~75℃；最适PH为5.5~7.5 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 实验原理 实验装置 实验步骤 1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液, 使淀粉溶液0.3ml/min的流速过柱。在流出5ml后接收0.5ml流出液, 加入1~2滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色. 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 淀粉 2.实验后,用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在4℃冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果. 1 2 3 4 课后练习 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶? 2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。 可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。 * * *