免疫组化的实验步骤.docVIP

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2017-06-14 发布于北京
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免疫组化的实验步骤.doc

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脱蜡前烤片时间（）下午： 1、脱蜡：二甲苯 2瓶 5min、10min，100%乙醇2瓶 5min、10分钟，95%乙醇--5min，80、70、60各5min，清水中泡15分钟，后浸泡H2O2 15min 2、PBS3次/5min 3、抗原修复：用柠檬酸修复液，高压修复2min，冷却至室温 4、PBS冲洗3次/5min 5、滴加一抗，4℃冰箱过夜（12小时以上，固定一个时间）第二天上午 6、取出后放置半小时左右至室温，PBS冲洗3次/5min 7、滴加PV-6000，37℃恒温箱，25min，取出后PBS冲洗3次/5min 8、DAB显色（1ml底物液+一滴浓缩液），光镜下观察，看到棕黄色即可终止，用清水涮洗，显色时间不需要固定一个时间。 9、复染：苏木素 1min（染细胞核），---分化液（酒精+盐酸）1秒钟即可，后置于清水中20min 10、脱水：从70%--80%-无水乙醇5分钟---无水乙醇10分钟---二甲苯5分钟---二甲苯10分钟 11、封片：树胶封片，加盖盖玻片，晾干（二甲苯中浸泡可去除树胶）