凝血酶及其抑制剂在中枢神经系统的作用论文.docVIP

　　凝血酶及其抑制剂在中枢神经系统的作用论文 杨丽娟 赵冬梅 邬力祥 【关键词】 凝血酶 【关键词】凝血酶；凝血酶受体；PN- 1；中枢神经系统；缺血缺氧 越来越多的研究表明，凝血酶在神经系统正常发育和病理状态下发挥重要作用。凝血酶及其抑制物在脑软组织伤和脑脊液流速改变后进入血脑屏障增多。在发育的大脑或成人脑内凝血酶原和他们的受体局限于几个特定的区域。凝血酶具有毒性作用，包括在体外引起不同神经元和非神经细胞突触回缩、死亡。这些作用可通过细胞表面的受体调节，而且能被特异的丝氨酸蛋白酶抑制剂阻断。最近研究显示，应用PN- 1治疗能提高脊髓运动神经元凋亡的存活率，促进遂后损伤的修复。小剂量凝血酶(1～2 u/ml)能保护神经元和胶质细胞免受低血糖、缺血缺氧等损伤引起的细胞死亡［１］。用小剂量凝血酶预处理可明显减轻遂后脑内注射大剂量凝血酶引起的脑水肿、脑缺血的程度，若同时给以等剂量的水蛭素，则保护作用减弱。资料显示凝血酶在大剂量时发挥毒性作用而小剂量则具有保护作用［２］.freelRNA分布于全脑和脊髓背根神经节。脑部定位显示凝血酶受体表达最多的部位在新皮层、扣带回、 海马下脚、视丘下部、小脑和嗅球［１０］。这些受体在神经细胞和非神经细胞都有表达［１１］。凝血酶受体(TR)属于蛋白酶激活受体(PAR)家族，最早发现的凝血酶受体命名为PAR1，PAR1mRNA在中枢神经系统中广泛表达,包括大鼠星形细胞和脑毛细血管内皮细胞、小胶质细胞、星形胶质瘤细胞、神经元和鸟脊髓运动神经元［１２］，脑内主要表达于海马、皮质和扁桃体等部位。PAR2和PAR3高表达于海马、皮质、扁桃体、丘脑、下丘和纹状体。PAR4与PAR2和PAR3表达类似，只是在纹状体不表达［１３］。不像传统的生长因子如EGF、PDGF直接激活细胞表面的络氨酸激酶受体，凝血酶激活G蛋白耦连受体。凝血酶受体有7个疏水的螺旋状跨膜区域,形成3个胞外环状结构和3个胞内环状结构。胞外N端在第1个穿膜区之前大约有100个氨基酸,其中紧靠41位精氨酸的N端序列与凝血酶识别切割位点有关;与水蛭素的C端具有同源性的TR53～64序列, 既可与凝血酶活性位点结合，也可与其阴离子结合位点结合［１５］。凝血酶与上述2个序列相互作用，在PAR1的41位与42位间通过蛋白水解作用使其分裂,产生一个新的称为栓系配体的N末端,与受体胞外第2个环和靠近第1穿膜区N端的结合位点起作用,产生跨膜信号传递［１３］。受体激活刺激第二信使如cAMP和Ca2+，进而调节蛋白激酶活动。在细胞研究发现,凝血酶可激活PLC、PLA、PKC、MAPK、络氨酸激酶和腺苷酸环化酶。主要通过以下途径：①凝血酶激活PLC形成IP3和DAG，IP3激活一方面使细胞膜上钙通道开放，Ca2+内流增加；同时开放细胞内钙池，Ca2+释放增加。胞内Ca2+浓度升高。PLC抑制剂、内质网Ca2+抑制剂、钙通道阻制剂和胞外Ca2+降低均可使培养的脑微血管内皮细胞内Ca2+升高幅度降低［１４］。说明凝血酶通过影响Ca2+跨膜内流和钙池的释放引起胞内Ca2+升高。②DAG和Ca2+激活PKC，引起核转录因子活化和转位。③激活MAPK激酶，促进细胞增殖［１５］。由PLC- IP3/Ca2+- PKC或IP3途径激活MAPK系统。MAPK磷酸化激活细胞内PLA2，PLA2诱导花生四烯酸释放和前列腺素及白三烯合成，这一系列反应对于调节血管通透性和血管平滑肌细胞增殖是非常必要的。然而，这一系列反应在神经系统可导致神经细胞死亡。前列腺素导致血小板聚集，血管收缩，引起组织缺血、细胞死亡。而花生四烯酸可引起膜破裂，细胞破坏［１６］。 2凝血酶及其抑制剂在神经系统的作用 凝血酶可使蛋白水解激活，可抑制几种无血清培养细胞的长期形态分化，包括脊索和脑内的神经元、成神经瘤细胞、星形胶质细胞和神经上皮细胞。星形胶质细胞对维持脑的正常生理功能是非常重要的［１１］，包括维持离子平衡，调节神经递质浓度，抗氧化，参与信息传递。还有关于成熟神经胶质细胞形成胶质网络限定脉管系统，并深入脑膜参与脑出血控制的报道［１７］。星形胶质细胞也合成和分泌神经营养因子，为不同神经细胞生长提供营养。星形胶质细胞与神经元联系依赖星状突起，改变突起可以干扰星形胶质细胞与神经元的联系。如果星形胶质细胞培养在含血清或凝血酶的介质中，其周围的突起就会改变，增加凝血酶浓度将使培养的细胞突起减少、回缩、细胞变圆，加入凝血酶抑制剂这些作用将被阻断或逆转。加入凝血酶后的作用发生迅速，在加入后几分钟就有作用，而加入抑制剂后需要几个小时才能恢复［１８］。总的来说，凝血酶如不被其抑制剂阻断，可消弱星形胶质细胞与周围环境联系的能力，星形胶质细胞参与血脑屏障处紧密连接的形成，凝血酶将破坏星形胶质细胞形态,导致血脑屏障的破坏