中药渣微生物转化利用菌种筛选研究.pdfVIP

of MicrobialStrains Study Screening 一 ● …1…‘- 一‘。。一 for andUtilization Transformation Medicine ofChineseHerbal ADissertation tothe of Normal SubmittedCommittee Zhejiang University Forthe of Degree MasterofScience Jiao By Qiaofang Researcher-Shi Supervisedby Yuefeng 2010 April of Sciences Agricultural ZhejiangAcademy Hangzhou，China 中药渣微生物转化利用菌种筛选研究 摘 要 中草药业是中国的传统产业之一，每年生产出大量中成药的同时也产生出相当数 量的药渣，其年排放量已达3000万吨。目前产生的中草药渣中除了含有大量粗纤维外， 还含有较多的中药有效活性成分和粗蛋白、粗脂肪、矿物质等营养素，仍具有较高的 营养和药用价值。本课题以黄芪药渣为研究材料，从采集的样品中筛选出具有高效破 解植物细胞细胞壁功能的微生物菌株，并通过微生物发酵处理使中草药渣中更多的有 效成分和营养物质得到释放，提高其利用率，以期最终开发出新型的中草药渣饲料添 加剂，为绿色养殖业发展提供技术支撑。研究结果分述如下： 初筛采用CMC(羧甲基纤维素)分离培养基从野外采集的样品中共分离到能以 CMC—Na作为唯一碳源生长的微生物菌株160株。再采用刚果红纤维素筛选培养基，从 160株菌株中筛选得到10株具有较强纤维素降解能力的微生物菌株，包括8株细菌和2 株真菌。 复筛采用高效液相色谱法检测初筛10株菌株发酵后黄芪药渣培养液中黄芪甲苷的 含量，发现其中真菌L-6、细菌64和细菌54的药渣发酵液中黄芪甲苷的含量最高；而且 三株菌株破解植物细胞壁的功能最强。 再筛中药渣细胞壁的主要组成成分是纤维素、半纤维素(主要是木聚糖)和果胶 等，所以，再筛实验中我们通过检测羧甲基纤维素酶、滤纸酶、木聚糖酶、果胶酶等四 种酶活来衡量破解中药渣细胞壁能力和转化中药渣中动物不能吸收的各种细胞壁组成 成分为动物易于吸收的小分子营养成分的能力。再筛实验表明，在发酵36h，48h，60 h，72 h四个测定时间段，真菌L一6产生的羧甲基纤维素酶、滤纸酶、木聚糖酶等三种 酶活总体上明显高于细菌5。和细菌64，果胶酶活三菌株差异不大。因此，我们最终选 定真菌L一6为中药渣微生物转化利用功能菌株。 发酵工艺初步研究通过单因素实验，明确了以价廉的淀粉、麸皮作为L-6发酵的 CaCl：和吐温一80均不利于L一6发酵；正交试验，初步提出了一套L-6的优化发酵工艺： 在1g黄芪药渣，加35 mL水的基本发酵培养基的基