现代生物技术_03动物基因工程分析.pptVIP

第三章2 动物基因工程 概述 1、动物转基因技术的基本概念 2、外源基因导入动物体内的研究方法 3、动物转基因的载体 1）病毒载体 2）反转录病毒载体 4、转基因动物技术的应用 1）研究基因的表达与功能 2）利用转基因动物或细胞生产生物大分子 3）利用转基因动物细胞生产人体蛋白 4）利用转基因动物技术改良动物 5、克隆动物 概况 1、1982年，美国华盛顿大学R..D.Palmiter等采用显微注射法，将大鼠生长基因导入小鼠受精卵的雄原核内，得到转基因小鼠以来，实现了动物种系内和种系间细胞的基因转移，构建了各种转基因动物。 2、转基因动物技术具有广泛的应用：研究基因的表达与功能，生产生物大分子；生产人体蛋白；改良动物；医用转动物模型。例如研究哺乳动物的基因表达和发育、人类疾病的动物模型系统的建立，在动物乳汁中生产重要的医用蛋白等等。 3、转基因人的研究只能限于体细胞的基因治疗，具有遗传特征修饰的转基因人的研究，可否迈出历史的一步？问题多多。 4、动物基因转移无论用何技术，转移效率极低。 第一节 基本概念 1、定义： 基因转动物（transgenic animal)：指基因组中整合有用转基因技术所导入的外源基因（或特定的DNA片段），整个技术则称为转基因技术(transgenic technology或transgenesis)。 理论上讲任何动物都可以通过性系基因操作成相应的转基因动物（如：鱼、鼠、羊、牛等） 2、动物转基因技术程序 ①将克隆的外源基因注射到一个受精卵的细胞核中； ②接种后的受精卵移植到雌性受体的子宫，使其顺利完成胚胎发育； ③移植后的受精卵发育生长为后代，其中的部分后代其细胞中都携带有转入的外源基因； ④利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜或种禽，培育新的纯合系。 3、动物转基因的效率 动物基因转移的起点和终点分别为受精卵和含有整合转基因的动物子代。在这个过程中，转基因的效率极低。以小鼠转基因为例： 以小鼠转基因为例： 注射外源基因后受精卵的存活率为86％； 将受精卵移殖到母鼠子宫内后受精卵的存活 率为25％ 母鼠的怀孕率为80％ 转基因在基因组上的整合率为24％ 因此小鼠转基因的总有效率约为4％ 4、动物基因的结构 1）基因组片段：分子较大，保持较完整的基因结构。 2）融合基因：将不同来源的结构基因、非编码序列、 表达调控序列重组成杂合单元。 3）小基因：分别取同一基因的某一区域或若干区域组成转基因。 4）靶基因：结构基因或调控序列经诱变或定向突变处理后，重新输回动物体内。 5）插入基因：含有在动物染色体上随机或特异性插入位点，可装标记基因。 6）置换基因：两侧含动物基因或其他DNA区域的同源序列。 5、动物转基因的表达特性 1.转基因的时空特异性表达 动物基因表达调控的显著特性：时空特异性，特别是在发育过程中，相关基因的时序特异性和组织特异性表达更为严格。 2.转基因的可控表达 诱导动物细胞内的转基因，对其稳定高效表达至关重要，转基因的诱导条件取决于受体细胞的性质和启动子的类型。 3.转基因的共抑制效应 在转基因动物体内，转基因的表达常会发生转基因的失活，也称为转基因沉默。 共抑制效应特征 1）共抑制只发生在转基因与同源的内源性基因之间，对其他的基因表达不产生影响； 2）如果转基因与内源基因发生体内重组，则共抑制效应随之消失，基因表达恢复正常； 3）共抑制现象的发生与结构基因的编码区有关，但不依赖于启动子的来源和性质。 4）两个相同的转基因之间也能发生共抑制效应。 造成转基因共抑制效应的原因 1）转基因与其同源的内源性基因相互作用，形成某种状态而影响两者表达； 2）转基因与内源基因竞争性结合核基质和核包膜上转录翻译必须的非扩散元件，导致相互抑制； 3）两者转录出互为反义的RNA结构，使之失活并 迅速降解； 4）由于转基因的存在，受体细胞中mRNA的大量积累，并激活某些未知酶系的表达，导致mRNA降解。 转基因表达单方面失活的原因 转基因动物体内的转基因表达单方面失活，而同源的内源性基因却表达正常。 1）转基因被受体细胞识别为异己DNA，并将它甲基化修饰，使其失活； 2）转基因整合在不合适的染色体部位，受局部条件影响而不表达； 3）转基因本身的结构不利于其表达。 6、动物转基因的生物学特性效应 1）应用于动物基因组结构与功能的研究 以报告基因为转基因探测动物或人基因组中时空特异性表达调控序列； 以反义基因为转基因灭活相关的内源基因，构建基