DNA氧化损伤检测.pdfVIP

第 20卷 第 5期 分析测试学报 V0I20 No 5 2001年 9月 FEh~cJCESHIXUEBAO(JounudofInstrumenta1．~ala]ysis 2001 M 综一 DNA氧化损伤产物及其检测方法 蔡凌霜，曾昭睿 ，吴采樱 ～．．述 ～ (武汉大学 化学与分子辩学学院．湖北 武汉 430072) 摘 要 ：介绍 了DNA氧化损伤对生物体的影响．主要的DNA氧化损伤产物 8．羟基鸟嘌呤和5-羟基胞嘧啶的形成 及其检测方法．并对 目前 DNA氧化损伤产物研究存在的问腰进行了讨论 关键词 ：氧 自由基 ；DNA；氧化 ；损伤 ；8一羟基鸟 畸；5．羟基胞嘧碇 中图分类号 ：0657；0525 文献标识码 ：A 文章缩号：1004—4957(2001)05一O088—06 近年发现与括性氧 自由基损伤有关的疾病有 60种以上，其中包括威胁人类最严重的癌症 、心血管病 、糖 尿病 、艾滋病以及衰老。 括性氧是指氧的某些代谢产物和反应的含氧产物 ，如O：、O 、HO 、 ·OH、H 、 RO 、ROO 等 ，这些活性氧在生物体内可以造成 DNA许多形式的损伤 ：单链断裂、双链断裂 、链 内交联 、链 间交联 、碱基修饰 、腺嘌呤丢失等。 这些损伤引起 DNA结构的改变和功能的抑制或变化 ，从而使 DNA中遗 传信息的稳定性受到不同程度的破坏 ，具有诱发肿瘤的潜在威胁 。 DNA中正常的基本碱基成分有 4种 胞嘧 啶(c)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、鸟瞟呤(G)；这 4种碱基严格按照C G、T—A配对记录着生命的遗传信 息。 目前已知活性氧攻击 DNA碱基可形成二十几种修饰碱基 …．如 5．羟基胸腺嘧啶、5，6．二氢胸腺嘧啶、胸 腺嘧啶二醇 (顺式和反式)、5-羟甲基尿嘧啶、胞嘧啶二醇、5．羟基胞嘧啶、s-羟基腺螵呤、4．6-二氨基一5一甲酰 胺基嘧啶、5．甲酰尿嘧啶、8．羟基鸟嘌呤、2，6-~--氨基一4_羟基．5．甲酰胺基嘧啶、乙二醛 、5一甲酰屎氧苷 、2一羟 基腺嘌岭等。 对于DNA氧化损伤产物的检测 目前主要有高效渡相色谱 一电化学检测 (I-IFI．C—EC)、高效液相 色谱 一鬃外检测(I-IILC—trY)及气相色谱 一质谱检测(CC—MS)等方法。 在 已发现的DNA氧化损伤产物中，8一羟基鸟嘌呤的化学性质比较稳定，被认为是反映DNA氧化损伤较灵 敏和稳定的指标 ，大量研究表明8一羟基鸟嘌呤可以作为内源及外源因素对 DNA氧化损伤 的生物标记物 】 基因组 中高含量的8一羟基鸟瞟呤可能使特异糖基酶完全修复 DNA损伤 的能力丧失 “ 用一种人工合成的第 12位密码子的第二个碱基 G被 8_羟基鸟嘌呤替代的原癌基因C．Ha-ms转染 NIH3T3细胞 ．可以使部分细胞发 生恶性转化 。 8一羟基鸟嘌岭能够显著抑制 HpaIIDNA甲基转移酶所致邻近胞嘧啶碱基的甲基化0。 当 DNA片段中靶位胞嘧啶下游一或二位碱基为 8一羟基鸟嘌呤时，人类 DNA甲基转移酶甲基化胞嘧啶的能力显 著降低 ，从而引起某些癌基因(C-myC和C—Ha一嘶)的异常表达 “ 5一羟基胞嘧啶是另一种较为重要 的I)NA氧 化损伤产物 ，将a兑氧胞嘧啶三磷酸苷 (dCTP)用氧基试剂(FeSO,+过氧化氢 +抗坏血酸)处理 ．反应后的产物用 反相 阴离子交换 ／iPLC分离后 ，通过人体免疫缺乏反转录酶(my—a-r)插人含有靶位基因的DNA中．再测定 DNA中产生的突变 识别 了其中一种 DNA氧化损伤产物即5．羟基胞嘧啶 ．它能有效地插人DNA，且在大肠 肝菌(Escherc／h／aco／i)中诱导 c—T转换的额率达 2．5％，远远大于其他的氧化损伤产物 (胸腺嘧啶二醇 0．3％ J和 8-氧鸟瞟呤 0．6％ )所引起的突变频率 ；近年来的一些研究表明，在大肠杆菌 中的LacI基 因和 转染人细胞中SupF基因的白发突变是非随机的，其中50％或更多的碱基突变是C,C~AT颠换 (tran~ersions)“。 虽然 C,C和 AT碱基对都是同等程度被活性氧损伤 ，但 C,C损