叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究论文.docVIP

　　叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究论文 张武雄,凌丽,何练芹,臧林泉,潘雪刁,朱亮 【摘要】 目的 研究叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白在体外对肿瘤细胞的毒性及经叶酸受体介导的靶向性。方法 选用叶酸受体表达阳性FR(+)宫颈癌HeLa细胞及叶酸受体表达阴性FR(-)肺癌A549细胞进行实验。用MTT法观察叶酸偶联物对细胞的毒性作用,同时利用游离叶酸能与叶酸偶联物竞争性结合叶酸受体的原理，考察叶酸偶联物是否具有经叶酸受体介导的靶向性。结果 叶酸偶联物对FR(+)HeLa细胞具有比5氟尿嘧啶原料药更高的抑制率,能有效的靶向FR(+)HeLa细胞,且细胞毒性作用能被过量的外源性游离叶酸所抑制,而叶酸偶联物对FR(-)A549细胞作用很弱。结论 叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白能经叶酸受体介导靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。 【关键词】 叶酸偶联;5氟尿嘧啶;细胞毒性;靶向性 Abstract:Objective To study the cytotoxicity and targeting ability of folateconjugated 5fluorouracilalbumin via folate receptormediated endocytosis on tumor cells in vitro.Methods The folate receptor positive FR(+) HeLa cell and FR() lung A549 cell ent. The cytotoxicity of the folateconjugate on tumor cells easured by MTT assay. According to the petitive inhibition principle and due to that free folate had high affinity for folate receptor,free folic acid ediated endocytosis.Results The cytotoxicity of folateconjugate to FR(+) HeLa cell e concentration,and could be inhibited by excess free folic acid,in could be targeted into tumor cells ediated endocytosis significantly. Key o Forma 371);SZ93自动双重纯水蒸馏器(上海雅荣生化设备仪器有限公司)。 1.2 实验材料 宫颈癌HeLa细胞、肺癌A549细胞(本院药理教研室保存);MTT(Thiazolyl Blue 噻唑兰,Sigma分装,北京鼎国生物技术有限责任公司);RPMI 1640培养液(吉诺生物医药技术有限公司);RPMI Medium 1640无叶酸培养基(CIBCO);特级胎牛血清(天津市濒洋生物制品科技责任有限公司);胰酶(Sigma,北京利科恒达科贸有限公司); 96孔培养板(加拿大 JET Biochemicals Intl.，Inc); 叶酸(企业标准，上海新量化工试剂有限公司);5氟尿嘧啶(5FU，南通精华制药有限公司);5氟尿嘧啶白蛋白(5FUB，实验室自制);叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白(5FUBF，实验室自制),其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 药物在体外的细胞毒性10,11 实验分5组:空白对照组(不加细胞)、阴性对照组(加细胞,不加药)、5氟尿嘧啶组(5FU,阳性对照组)、5氟尿嘧啶白蛋白组(5FUB,不接叶酸)、叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白组(5FUBF,接有叶酸),用含10%(φ)胎牛血清RPMI 1640培养液培养细胞,取处于对数生长期、生长状态良好的细胞,用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞,离心使细胞沉淀,用PBS洗涤,用含10%(φ)胎牛血清无叶酸RPMI1640培养液配成单个细胞悬液,细胞密度为105个/mL以每孔104个细胞接种于96孔培养板中,每孔100 μL。将培养板移入培养箱中,在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下分别培养24 h后更换100 μL无叶酸RPMI 1640培养液,并分别加入5FU,5FUB,5FUBF药液各100 μL,使终质量浓度分别为2 μg/mL,10 μg/mL,50 μg/mL的 (偶联物均折算成5Fu的等价浓度),再培养36 h后,每孔更换为100 μL无血清无叶酸RPMI1640培养基的培养基,加入20 μL MTT溶液( 5