第6章各类化学成分分析1分析.ppt

* 2与金属盐类试剂的络合反应 例 银黄注射液的鉴别： 取本品1ml于试管中，加5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液各0.3ml，溶液呈黄色；另取注射液0.1ml，加水10ml，摇匀，取稀释液2ml，加5%二氯氧锆溶液1-2滴，溶液呈黄色，再加盐酸1-2滴，颜色不褪。 * （二）薄层色谱鉴别 吸附剂：硅胶、聚酰胺、纤维素 硅胶色谱分离弱极性化合物较好 聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳 纤维素薄层板则适用于分离多糖苷混合物 显色：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。 * 例 二陈丸中橙皮苷的鉴别 处方 陈皮 半夏（制） 茯苓 甘草 取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（100﹕17﹕13）为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20﹕10﹕1﹕1）的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 * 薄层板为氢氧化钠溶液制备的硅胶G板，可有效地减少黄酮类成分在硅胶板上的拖尾现象；进行二次展开，可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板上的分离度；三氯化铝显色后检视荧光，有效地增大其检测的灵敏度。 * 例 双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸鉴别 处方 金银花 黄芩 连翘 取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液。吸取上述三种溶液各1~2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 * 四、含量测定 （一）总黄酮含量测定 （二）黄酮类单体成分含量测定 * （一）总黄酮含量测定 1直接测定 2比色法 * 1直接测定 黄酮类化合物具有特定的紫外吸收峰，含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经一定的提取纯化后，可直接于最大吸收波长处测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算其含量。 * 灯盏细辛注射液中总咖啡酸酯的测定 处方 灯盏细辛提取物 对照品溶液的制备 取1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L碳酸氢钠溶液制成每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸10 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置200ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照紫外-可见分光光度法，在305nm波长处测定吸光度，即得。 本品每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸计，应为2.0～3.0mg。 * 2比色法 黄酮类化合物显色以后显色物与背景最大吸收波长差别较大，可消除背景（即阴性空白）的干扰，以提高本法的选择性及灵敏度。常用铝盐作显色试剂。 * 例 消咳喘糖浆中总黄酮含量测定 处方 满山红 对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置100ml量瓶中，加60%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁60μg）。 * 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml与5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、1mol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟；以相应的溶液为空白。在420nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标、绘制标准曲线。 * 测定法 精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加0.1mol/L三氯化铝溶液”起依法操作，精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。 * （二）黄酮类单体成分含量测定 1薄层色谱法 2高效液相色谱法 * 1薄层色谱法 样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行层析，达到分离目的。 层析后将含有待测组分的色斑刮下，用适宜溶剂洗脱，用紫外-可见分光光度法测定。 用薄层扫描仪（单波长或双波长法）可直接在薄层板上扫描测定。 * 2高效液相色谱法 常用法