用激光扫描显微镜对人视网膜组织断层图像的分析.pdfVIP

第 22者 第 2期 解 剖 学 报 Voi．22．N o．2 1991年 4 ACTA ANATOM ICA SINICA A口r． 199I 用激光扫描显微镜对人视网膜组织 断层图像的分析 凋 明华 王云亮 (香港犬学医学院解甜学系) 摘要 本文用鼗光扫描显微镜盼遘射光、反射光共聚焦扫描法，对非染色的人视网膜锗片耘 本，．由外屠向内层依次进行光学断层观察 在视网膜浅部的翦 1个断层中- 只见有扦俸，其横径 为 1．5 m，相邻外节的中心耐距为 1～1．3 mJ向内的断层中。锥体基的直径为 3～8．2 吡，其 中心间距为 5～1l m。杆体的单位密度为 443964个 ／mm ，锥体为 2 !28十／mm。。本 文 对 选 种显微镜观察的一般特点厦临床应用问题进行了讨论。 ’ 关键词 激光扫描显擞镜术 共聚熊显镦镜米 人视网膜 光学断层 临睐应用 1 视 网膜是人眼接收 自然界光线信息的重要结构。近年来．由于多种新技米的应用，如电 子显微镜和核磁共振技术，以及神经生物学和视觉分子生理学的进展，使视觉信息传导方面 的研究取得很大进步。关于视网膜的电镜和光镜研究较多f1叫 。激光扫描显微镜 (1asers妇 。 microscope，LSM)的发明[．，为视网膜的研究握供了新的方法。LSM是以激光束为，源 能对所观察的标本作机械性扫描，由光电倍增管检蒯器检测光瞳乎面上的光密度而成像。由 于应用共聚焦 (confoca1)原理使景深缩短，并可以对一定厚度的标奉，直接作特定层次或连 续的光学断层显象(tomogram) 我们应脯 莲种显微镜对人视网膜各层的结榭 特 点’作 了琬 _ ， 察 。 ， 材 料 和 方 法 ． 人眼标本2只，供者年龄分别为26岁和00岁，外伤猝死。死后约45分钟摘除眼球，捂 角麒缘切除角膜组织(供角膜移植)，余下的眼球后部立印固定于 2．5 戊=醛、3％多聚 甲 醛磷酸缓冲液 (0．1mol／L，pH7．4)，4。C过夜。切取赤道都眼球组织(包括视网膜、脒络曦 和巩膜)5×15mm。，在 0．1mol／L磷酸缓冲缓(pH7．4)中洗涤3次，共16分钟。按常规 方 法脱水，将视 网膜神经纤维层面向上，平铺于载玻片上。再用加拿大树胶封片，然后在LSM (CarlZeiss产品)下观察。激光光源有氩离子激光 (波长 488nm)或氟氖激光 (渡长 633-m)。 采用透射光、反射光共聚焦 (normaskiconfoca1)等方法，从视网膜外层向内层分别作 断层 扫描观察。显示在显象管屏幕上的图像可随时摄影。另一块相同部位 的标本，按常规方法处 理后，Epon 812包埋，半薄切片，用 lAo甲苯胺蓝染色，光镜下拍照作为对照。． 、 ， 结 果 和 讨 论 正常A视网膜切片的光镜照片 (图A)，用来同LSM 照片(图1～7)比较。用LSM反射 光共聚焦珐 见到在视细胞外节的断层图像中，主要是近乎纵向平行排列的细小杆俸。它们 ’ 奉文由c 。 h。基盎、香港大学和医学院研究基盎资助 蒂 一 2期 周明华等．用激光扫描显微镜对人视回膜组织断层图像的分析 ． 201 的横径约为 1．5p．m，相邻两外节的中心间距约为 l～1．3 m 在此断层图像 中，虽然见_不 到锥体，但是，散布于杆体外节之间的圆形无结构的黑色影