多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜HOXA10的表达论文.docVIP

　　多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜HOXA10的表达论文 王玮，李晓冬，郝桂敏，徐素欣 【摘要】 目的: 探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者经促排卵治疗后子宫内膜同源框基因A10（HOXA10）蛋白和基因水平表达的特点. 方法: PCOS患者20例，月经周期规则的15例患者为对照组. PCOS患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期，选取促排卵治疗成功而并未妊娠的PCOS患者12例，对照组15例，于月经来潮24 h内诊刮子宫内膜.freelRNA的表达. 结果: 免疫组织化学检测结果表明，PCOS组和对照组子宫内膜标本均可见HOXA10蛋白的表达，主要表达在腺上皮和间质细胞胞质内，而PCOS组子宫内膜HOXA10蛋白的表达弱于对照组. RTPCR检测显示PCOS组子宫内膜HOXA10 mRNA表达强度低于对照组. 结论: PCOS患者促排卵后子宫内膜HOXA10的低表达现象，可能与子宫内膜的功能受损有关. 【关键词】 同源框基因；多囊卵巢综合征；子宫内膜 0引言 同源框基因A10（HOXA10）［1］是细胞发育的重要转录因子和控制胚胎发育的主控基因. 成年期子宫内膜经历着活跃的周期性变化，这种周期性的组织破坏、再构建和重组的过程与胚胎发育过程的调控有某些相似之处，生育期的子宫内膜表达HOXA10基因［2］. HOXA10基因不仅调节子宫内膜细胞的增生与分化，同时还能影响相邻细胞间及远距离的信息传递，在正常月经周期和妊娠过程中诱导子宫内膜的正常分化和发育［3］. 多囊卵巢综合征(PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病，约占无排卵性不孕症的75％［4］，诱发排卵治疗是主要的治疗手段. 近80％ PCOS患者可获得排卵，但妊娠率仅35％～40％［5］. 我们观察PCOS患者经促排卵治疗后子宫内膜HOXA10基因的表达，以探讨PCOS患者子宫内膜容受缺陷与该基因的关系. 1对象和方法 1.1对象200506/200610因不孕而就诊于河北医科大学第二医院生殖医学科的PCOS患者20 例为PCOS组，年龄［31.6±3.0（23～37）］岁. 以同期月经周期规则、因输卵管因素或其他因素就诊的15例患者为对照组，年龄［30.6±3.3（ 25～38）］岁. 对PCOS患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期. 所有促排卵的PCOS患者及对照组均经B超监测，待卵泡成熟后，指导性交或行人工授精. PCOS的诊断标准：按照2003年鹿特丹修正的诊断标准［6］以下3项中符合2项：排卵稀发或无排卵；高雄激素血症的临床和/或生化体征；多囊卵巢. 排除其他病因（先天性肾上腺皮质增生、分泌雄激素的肿瘤和库欣综合征）. 标本选取PCOS促排卵治疗成功而并未妊娠的患者12例，对照组15例，均经征得患者同意，于月经来潮24 h内行诊断性刮宫. 刮取的子宫内膜组织用100 mL/L多聚甲醛固定，行HE染色和免疫组织化学测定，其中未妊娠的PCOS患者和对照组均选取8例分泌期的子宫内膜标本立即放入液氮中用于mRNA的提取. 主要试剂:HOXA10羊抗多克隆抗体浓缩液(sc7938)，效价1∶50（SANTA CRUZ公司）；ElivisionTM Plus免疫组化试剂盒、DAB显色剂（福州迈新生物技术开发有限公司）；βactin抗体（Santa Cruz公司）；HOXA10引物由北京赛百盛公司合成. 1.2方法 1.2.1光镜观察取各组子宫内膜标本，常规制备4 μm连续石蜡切片8张，HE染色后于光镜下进行观察. 1.2.2免疫组织化学染色检测取子宫内膜切片行常规脱蜡至水、3 mL/L双氧水孵育15 min，PBS冲洗，滴加一抗，4℃过夜. 用PBS代替一抗作为阴性对照，PBS冲洗，滴加Postblocking聚合物增强剂（试剂A），室温孵育30 min. PBS冲洗，滴加polyHRPanti mouse IgG酶标抗鼠聚合物（试剂B），室温孵育30 min. PBS冲洗，DAB显色剂显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片，光学显微镜下观察照相. HOXA10免疫组化染色以细胞质黄色为阳性信号. 所有图像信息采用捷达801图像分析系统，对所有切片中阳性区域的单位光密度值（Density）进行定量测定和分析.由2名有经验的病理科医师采用双盲法评估算分. 对少数不易判断的切片重新共同阅片而定. 1.2.3RTPCR方法测定Trizol法提取子宫内膜组织中总RNA. 逆转录反应体系15 μL，包括细胞组织总RNA 4 μL，0.5 g/L随机引物1 μL，5×107 u/L RNasin 0.5 μL，5×MMLV逆转录反应缓冲液(250 mmol/L TrisHCl， pH 8.3，250 mmol/L KCl，50