第二十一章现代分析方法.ppt

第二十一章 药品质量控制中的现代分析方法的进展 第一节 毛细管电泳及其应用 一、定义 电泳：带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳（electrophoresis） 以此对物质进行分离分析的方法即电泳法 二、发展简史 电泳现象早在十九世纪初就已发现（1808年俄国物理学家Re?ss进行了世界上第一次电泳实验）。但毛细管电泳技术最早是由瑞典科学家Hjerten 提出的，其广泛应用，则是在1937年用滤纸作为支持介质成功地进行纸电泳以后，特别是近几十年以来，电泳技术发展很快，各种类型的电泳技术相继诞生，在生物化学、医学、免疫学等领域得到了广泛应用。 国内最早是由竺安教授在1980年提出来的，他先后在中国科学院化学研究所和浙江大学建立了两个研究组。1992年CE开始受到国内广泛重视，发展很快。 三. 毛细管电泳的优点 1、高灵敏度 2、高分辨 3、速度快 4、进样少 5、成本低 分离模式：（一）毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE （二）胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC （三）毛细管凝胶电泳 （capillary gel electrophoresis,CGE) （四）毛细管等速电泳 （capillary isotachor-phoresis,CITP) （五）毛细管等电聚焦电泳 （capillary isoelectric focusing,CIEF) （六）毛细管电色谱（ capillary electrochromatography,CEC) （七）微芯片毛细管电泳 （microchip electrophoresis) 应用与进展 毛细管电泳技术可检测多种样品，如血清、血浆、尿样、脑脊液、红细胞、体液或组织及其实验动物活体实验；且可分离分析多种组分，如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析，以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等 1、离子分析 analysis of ion 2、药物分析 analysis of pharmaceutics 3、手性化合物分析 analysis of chiral compounds 4、氨基酸与蛋白质分析 analysis of amino acids 蛋白质分析 5、核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA CE和HGP 目前，人类基因测序已基本完成，人类基因组计划进入后基因组时代。但是，耗资巨大的HGP至少在现阶段并没有产生原先设想的强大影响力。这是因为人类基因组图谱并没有告诉我们所有基因的“身份”以及它们所编码的蛋白质。人体内真正发挥作用的是蛋白质，蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色，其中可能藏着开发疾病诊断方法和新药的“钥匙”。“后基因时代”，一个以“蛋白质组”为重点的生命科学的新时代到来，需要对蛋白质更多的研究，毛细管电泳技术将发挥更大的作用。 6、新进展advances and special topics （4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器，配备了针内进样探头和压力辅助进样技术 （5）仪器整体系统优化设计：色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。 美国食品与药品管理局（FDA）在1992年颁布了手性药物指导原则，要求所有在美国上市的外消旋新药，其生产者均需说明药物中所含的对映体各自的药理作用、毒性和临床效果。 手性药物对映体分离的方法 （1） 生物转化不对称催化法 （2）液-液萃取法 （3）传感器法 （4）渗透膜法 （5）重结晶法 （6）色谱法：手性衍生化法（CDR） 手性流动相添加剂法（CMPA） 手性固定相法（CSP）  2.手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添加剂法）：将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与样品形成手性络合物。常用的手性添加剂：配基交换型手性添加剂、环糊精类添加剂、手性离子对络合剂 给体—受体:如Pirkle型CSP， 纤维素衍生物类: CDMPC 主客体络合: 如环糊精、冠醚类CSP 手性配体交换色谱 蛋白质类 纤维素衍生物类CSP 纤维素是D(+)-葡萄