致病性地霉的分子生物学鉴定.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………3 研究论文致病性地霉的分子生物学鉴定 前言…………………………………………………………………66月U舌………………………………………………………………… 材料与方法…………………………………………………………6 结果…………………………………………………………………12 附图…………………………………………………………………14 讨论…………………………………………………………………19 结论…………………………………………………………………24 参考文献……………………………………………………………25 综述念珠菌性阴道炎的研究进展……………………………………28 致谢………………………………………………………………………44 个人简历…………………………………………………………………45 中文摘要 致病性地霉的分子生物学鉴定 摘 要 目的：临床上致病性地霉有林生地霉和白地霉等，林生地霉(Geotric hum silvicola)为新近发现的一种罕见地霉，首次从巴西果蝇和印度柞蚕 幼虫身上分离出来【l】。2002年，我科从一例脓癣患儿的皮损中分离得到一 株林生地霉，首次证实该菌可以感染人类【2】。2005年，我科又自一例中毒 性表皮坏死松解症患者的血液中分离出一株林生地霉【”，2006年黄文咧4】 等从足部溃疡中再次分离处一株林生地霉，说明本菌既能引起皮肤地霉 病，也可导致系统性感染。白地霉(Geotrichumeandidum)是地霉属的经典 代表菌种，白地霉引起的感染可侵犯呼吸系统、消化系统、循环系统、耳、 关节及皮肤。但以支气管感染最多见，偶可致全身播散性感染。2007年 告了l例先天性免疫缺陷病合并播散性马尔尼非青霉、白念珠菌及白地霉 感染的病例，2008年李秀丽【7】等首次报道了白地霉引起阴道炎两例。有关 林生地霉的形态学、致病性、动物试验、营养生理学等各方面均已作了研 究【8-9】【2-4]。而白地霉目前研究大多集中在其菌体蛋白的开发利用上，对其 临床致病性研究相对较少，鉴定仍依赖于表型特征。因此我们将从分子生 物学鉴定方面对致病性地霉菌做进一步研究。 近年来，随着科技的发展，分子生物学技术已被广泛的运用于真菌的 实验室诊断，而且被证明是真菌分类的有效方法【101。任意引物聚合酶链反 类鉴定和分型研究方面显示出巨大潜力，Liu等【ll】用AP．PCR法进行真菌鉴 定。本研究采用任意引物聚合酶链反应(AP_—PCR)对林生地霉皮损株、血 液株和白地霉进行分子生物学方面的鉴定，从而对不同菌种间的亲缘关系 作相似性分析，同一菌种不同部位的菌株做多态性分析，为I临床提供种间 及种内鉴定的简单、快速、可靠的方法。为探讨病原微生物的传染源、传 播途径以及流行病学调查等提供依据。从而有利于临床早期诊断和指导用 药。 方法：林生地霉皮损株与血液株为河北医科大学第四医院真菌室保 中文摘要 存，均由中国科学院微生物研究所鉴定。白地霉标准菌株购自中国科学院 微生物研究所菌种保藏中心。均经过复苏培养及形态学和生化鉴定。用 E．Z．N．A．YeastDNAKit提取地霉菌基因组DNA，采用任意引物AP3、 ATG、RP2、OPA．10、S034、S040、S 白地霉、林生地霉皮损株和血液株的基因组DNA进行扩增，对各病原菌 的DNA指纹的特征进行分析。 结果：成功提取了地霉菌的基因组DNA，其纯度和浓度均能满足PCR 反应的要求。地霉的种间鉴定结果显示，用九种不同引物扩增，不同菌种 同种真菌的DNA经扩增后显示不同的DNA带型，且同一模板在多次实 验中均产生～致的DNA带型，而且不同次提取的同种不同株真菌的DNA 经扩增后显示的主要DNA带型也是相同的。分离自不同感染部位的林生 一致。 DNA Kit提取的地霉菌基因组DNA可