脑缺血动物模型与抗脑缺血-培训课件.ppt

（二）脑温 实验中温度过高或过低均会影响神经细胞损伤。 脑温下降2～3℃对缺血性脑损伤，尤其皮质损伤具有明显的保护作用。 亚低温均可抑制脑缺血损伤. 在缺血期低温必须持续1 ～2 h才能起到保护作用，持续时间<30min则无效。 亚低温保护脑的可能机制： 降低脑耗氧量和能量代谢、减少乳酸堆积; 减轻炎性因子的损害; 保护血脑屏障; 减轻脑水肿及降低颅内压等。 因此，实验中应严格控制动物脑实质的温度。 （三）血糖 葡萄糖水平可影响脑损伤程度. 高血糖→缺血后的脑梗死体积↑ →缺血性损伤↑ 。 其机制可能与糖酵解增加，乳酸堆积引起酸中毒有关。 葡萄糖通过酵解可产生2分子丙酮酸，同时产生2分子ATP。 在有氧条件下，丙酮酸会在丙酮酸脱氢酶作用下，进行代谢，并在线粒体内经一系列反应产生CO2和36分子ATP； 但在缺血缺氧时，丙酮酸脱氢酶活性受抑制，此时丙酮酸则在乳酸脱氢酶作用下产生乳酸，局部脑组织PH下降。 因此，当葡萄糖由有氧氧化转化为无氧酵解时，不但使能量产生减少，还可引起脑组织局部环境酸度增加。 脑缺血后，由于脑血流的减少，葡萄糖供应的减少可能会限制乳酸的产生量。 如果此时增加葡萄糖的血浆浓度，大量糖就会通过酵解产生乳酸，从而加重酸中毒。 因此控制血糖水平对模型的损伤程度也非常重要。 可在模型制作之前，动物统一禁食12h。 （四）血压和血气 血压对脑梗死模型有一定影响，高血压的动物缺血改变出现早，而全身低血压也会加重脑损伤， 因此，实验应常规监测平均动脉压。 脑缺血时，血气对损伤程度也有较大影响，高碳酸血症和酸中毒明显增加脑梗死体积。 模型制作时，应抽取血样进行血气分析，测定动脉血氧，二氧化碳分压，氧饱和度和血液酸度。 麻醉时配合人工呼吸可维持较稳定的血气指标，使对实验结果更好进行判断。 （五）鼠种和性别 MACO后Wistar 大鼠平均梗死体积最小，变异大； Sprague-Dawley 大鼠梗死体积稍大，但同样变异大； Fisher-344 大鼠梗死体积最大且变异性小; 高血压大鼠比正常血压大鼠梗死体积大; 因雌激素对脑缺血具有保护作用，实验中应全部选择雄性大鼠。 脑缺血动物模型 脑缺血动物模型 动物模型是医学药学研究中的一个重要手段，尤其对于缺血性脑血管病，能即刻制造或模拟血流下降或阻断，只有利用动物模型才能进行。 动物模型具有方便、快捷、条件可控、脑缺血程度一致等优点。 近年来，脑缺血的研究进展有利于各种动物模型的广泛应用。 建立和选择理想的缺血性脑损伤动物模型，对于缺血性脑血管病研究具有重要意义。脑缺血动物模型对以下研究具有很重要的实际应用价值: (1)不同脑缺血状态下的病理学改变； (2)缺血半暗带的研究； (3)再灌注损伤； (4)缺血本身导致的病理生理学变化； (5)干预治疗对缺血性损害的保护作用； (6)缺血性损害的部分机制等。 脑缺血动物模型的分类 各种动物模型具有不同的特点，因此应根据不同的研究目的选择最适宜的动物模型。 根据动物种类分类： 可分为猴、狗、大鼠、小鼠等脑缺血模型。 其中啮齿类动物因价格便宜、来源充足、制作模型方法简单、存活率高、脑血管解剖和生理特点与人接近，被广泛用作脑缺血及缺血再灌注模型； 根据缺血范围分类：又可分为全脑缺血和局灶性缺血两种。 现将常见的脑缺血动物模型概述如下： 一、全脑缺血模型(Global cerebral ischemia models) 　全脑缺血模型是完全阻断或骤然降低大脑的血流，造成全脑缺血。 近年来利用啮齿类动物复制全脑缺血模型，在缺血性脑损伤的研究中较为广泛。共同特点：缺血暂时广泛地影响各个脑区，但病理改变发生在易损区。 大鼠四血管阻断模型[The Four-Vessel Occlusion (4VO) Model in the Rat] 大鼠四脑动脉阻塞模型：双侧椎动脉和双侧颈总动脉阻断。 用3％水合氯醛麻醉（300mg/kg,ip.）。 然后于枕骨下作1cm左右切口，暴露第一颈椎左右两个横突孔，以1411高频小电刀插入横突孔烫闭双侧椎动脉。 24h后乙醚麻醉状态下切开颅顶皮肤，于矢状缝与冠状缝相交及颞骨与人字缝相交处分别埋植脑电极，接于SJ-42多导生理记录仪，以在实验过程中记录大鼠的脑电图（EEG）及翻正反射恢复时间。 将大鼠仰卧位固定，分离双侧颈总动脉。 大鼠清醒状态下用小动脉夹夹闭双侧颈总动脉，可见大鼠意识和翻正反射消失，眼变白，竖毛，呼吸加快。 30min后去除动脉夹，造成再灌注模型。 再灌同时股静脉注射60mg/kg伊文思蓝。60min后大鼠断头取脑，然后用生理盐水和丙酮混合液（3：7v/v）制成10%匀浆（W/V）。 离心，取上清液，在620nm处测吸光度表示脑组织中伊文思蓝含量，以此反映受试药对脑血管通透性的影响。 优