氰化高铁血红蛋白测定法-培训课件.pptVIP

(HGB) 氰化高铁血红蛋白测定法 原理： 血液中除硫化红蛋白(SHb)外的各种血红蛋白(如氧化血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物)均可被高铁氰化钾氧化称高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-)结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有一个较宽的吸收峰，它在540nm处的吸光度同它在溶液中的浓度成正比，常规测定可以从HiCN参考液制作的标准曲线上读取结果。 氰化高铁血红蛋白测定法 方法学评价 是国际血液学标准化委员会推荐的参考方法，该法操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是氰化钾试剂中剧毒，使用管理不当会造成公害。 试剂 氰化高铁血红蛋白测定法试剂 氰化钾[KCN] 0.050g 高铁氰化钾[(K3Fe(CN)6)] 0.200g 无水磷酸二氢钾 [KH2PO4] 0.140g 非离子表面活性剂 0.5-1.0ml 上述成分分别溶于蒸馏水中混合，再加蒸馏水至1000ml混匀，试剂为淡黄色透明溶液，PH值在7.0-7.4。血红蛋白应在5min内完全转化为高铁血红蛋白。 ▼贴标签：写明试剂名称、配制时间、有效期、贮存法。 检测步骤 制备标准曲线 将市售氰化高铁血红蛋白(HiCN)参考液稀释为四种浓度(200g/L、100g/L、50g/L、25g/L)，然后以HiCN试剂调零，分别测定各自在540nm处的吸光度，以血红蛋白浓度(g/L)为横坐标、绘制标准曲线。 常规检测操作 ⑴ 取小试管1支，加入HiCN试剂5ml； ⑵ 用清洁干燥微量吸管准确吸取末梢静脉 血20ul；擦去管外余血，将吸管插入小试管中稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液，清洗吸管2-3次，混匀； ⑶ 静置5分钟后，测定待测标本在540nm下的吸光度； ⑷ 查标准曲线求得血红蛋白含量。 计算公式 血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458/44000 ×251 =测定管吸光度×367.6 式中：64458为目前国际公认的血红蛋白平均分子量 44000为1965年国际血液学标准化委员会公布的 血红蛋白摩尔吸光系数。 251为稀释倍数 生物参考区间 成年男性 131-172 g/L 成年女性 113-151 g/L 新生儿 180-190 g/L 婴儿 110-120 g/L 儿童 120-140 g/L 警告值(危机值) Hb＜50 g/L 或 ＞ 250 g/L 贫血程度划分 轻度 Hb 正常下限 —91 g/L 症状轻微； 中度 Hb 90-60 g/L 体力劳动时心慌气短； 重度 Hb 60-31 g/L 休息时感觉心慌气短； 极重度 Hb ≤ 30 g/L 常合并贫血性心脏病。 注意事项 HiCN试剂应贮存在棕色的有塞的玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低 HiCN试剂应在4℃保存，不能0℃保存，因结冰可使试剂失效 白细胞过高或球蛋白异常增高时，可产生浓度干扰实验 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应除毒处理后再弃去 质量控制 HiCN试剂应4℃保存，否则试剂失效，直接影响检测质量 试剂应保持新鲜，至少一个月配制一次 样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，可干扰实验，解决方法是：白细胞过高，离心后取上清液比色；球蛋白异常增高(如肝硬化者)，比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清后再比色 血红蛋白 （HGB） 临床意义 生理性变化 增高 减低 新生儿、 高原地区居住者 主要见于婴幼儿 老年人 及妊娠中晚期等 血红蛋白 （HGB） 临床意义 病理性变化 增高 减低 真性红细胞增多、 代偿性红细胞增多症 先天性心脏病、 慢性肺部疾病、脱水 各种贫血、白血病 产后、手术后、大量失血 结果分析 测定值假性增高 稀释倍数不准确 红细胞未完全溶解 血浆中脂质或蛋白质量增加 废液处理 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应首先以水稀释(1:1)，再加次氯酸钠35ml/L，充分混匀，放置15小时以上，使CN-氧化成CO2和N2挥发，再排入下水道，废液不能直接与酸性溶液混合，避免产生剧毒的氰氢酸气体