乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶9在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.pdfVIP

乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9在 非小细胞肺癌中的表达及临床意义 摘 要 目的：通过检测乙酰肝素酶 （heparanase ，HPA ）和基质金属蛋白酶- 9 （matrix metal loproteinases -9，MMP-9 ）在非小细胞肺癌（NSCLC ）与正 常肺部组织中的表达，初步探讨HPA和MMP-9在NSCLC 的发生、浸润、转 移中的作用。方法：用免疫组化SP法检测120例NSCLC组织 （鳞癌60癌， 腺癌60例）和30例正常肺部组织中HPA和MMP-9的表达水平。NSCLC组织 标本均取自四川省泸州医学院附属医院病理科，所有患者均未作任何放疗 或化疗。30例正常肺部组织标本作对照。根据NSCLC标本组织分化程度将 高- 中分化分为第一组，低分化分为第二组；根据病理类型鳞癌为第一组， 腺癌为第二组；根据患者临床及病理相关信息进行TNM分期：I期为第一组， II-III期为第二组，IV期为第三组。所有组织标本用10%福尔马林固定，以 石蜡包埋，进行常规4μm连续切片。经石蜡切片进行常规脱蜡为无水后， 蒸馏水予以冲洗，磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline, PBS ）浸泡5min 。 高压高热修复抗原，然后取3%过氧化氢甲醇液孵育10min以便清除内源性 过氧化酶的活性。其次取正常山羊血清封闭交叉反应产生的非特异性着色。 滴加一抗（HPA兔抗人多克隆抗体的稀释度为1：50 ；MMP-9兔抗人多克 隆抗体的稀释度为1：100）孵育，用PBS冲洗，以PBS缓冲液代替一抗作为 阴性对照。滴加生物素标记二抗进行孵育，又用PBS冲洗，滴加辣根酶标 记链酶卵白素工作液（S-A/HRP ）进行孵育，再用PBS冲洗，DAB显色， Mayer苏木精溶液轻度复染，酸化，蓝化，梯度脱水，透明，封片，最后用 3 显微镜进行观察。要注意控制背景。HPA 阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆中， 少数表达于细胞核内，均呈 细颗粒状或团块状； MMP-9阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆和胞膜中，呈 细 颗粒状或团块状，散在点状分布。按每张切片阳性细胞比例数、着色深浅 划分为-、+ 、++ 、+++共四个等级，以几乎不着色或着色细胞少于5%为（- ）， 着色较淡或着色细胞占整张切片5%~25%为弱阳性（+ ），着色适中或着色 细胞占整张切片26%~50% 中度阳性（++ ），着色较深或着色细胞占整张切 片大于50%强阳性（+++ ）。结果：⑴NSCLC组与正常肺部组织组比较，HPA 的表达水平和MMP-9的表达水平均不同，且NSCLC组的HPA与MMP-9表达 水平均高于正常肺部组织，差异有统计学意义（P0.05 ）。⑵腺癌组和鳞癌 组的HPA 表达水平差异无统计学意义（P0.05 ），而腺癌组和鳞癌组的 MMP-9表达水平差异有统计学意义（P0.05 ）。⑶根据NSCLC 的分化程度， 低分化组的HPA和MMP-9表达水平均较高- 中分化组高，差异有统计学意义 （P0.05 ）。⑷根据TNM分期，I期组﹑II-III期组和IV期组的HPA和MMP-9 表达水平不全相同，差异有统计学意义（P0.05 ）。且经两两比较，II-III 期组HPA和MMP-9表达水平高于I期组，IV期组的HPA和MMP-9表达水平高 于I期组﹑II-III期组，差异有统计学意义（P0.05 ）。⑸根据等级相关分析， HPA与MMP-9在非小细胞肺癌中的表达成正相关（r=0.416 ，P0.005 ）。结 论：⑴HPA和MMP-9参与了非小细胞肺癌的形成过程。⑵HPA和MMP-9在 非小细胞肺癌的进展、侵袭和转移方面起到了促进作用。⑶HPA和MMP-9 在NSCLC 中的发生发展中可能起到协同作用，共同促进NSCLC 的发生发 展。 4 关键词：乙酰肝素酶 （HPA ）；基质金属蛋白酶-9 （MMP-9 ）；非小细胞 肺癌（NSCLC ） 5 T