过表达PDCD5对人胃癌BGC823细胞增殖活性影响.docVIP

过表达PDCD5对人胃癌BGC823细胞增殖活性影响 　　[摘要] 目的 通过体外实验研究过表达程序性细胞死亡5（PDCD5）因子对人胃癌BGC823细胞增殖抑制和顺铂敏感性的影响，探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗胃癌的可行性。 方法 采用MTT法检测顺铂对实验组（过表达PDCD5）、阴性对照组（转染空载体）和BGC823细胞组的增殖抑制作用，荧光观察吖啶橙染色的各组细胞形态学变化，流式细胞仪检测顺铂对各组细胞凋亡率和细胞周期的影响。 结果 顺铂对BGC823细胞的生长有抑制作用，且呈时间-剂量依赖性，48 h顺铂抑制实验组、阴性对照组和BGC823细胞组的IC50分别为（14.25±1.68）、（20.85±2.01）和（22.03±1.85）μmol/L，实验组显著低于BGC823细胞组和阴性对照组（t=2.765，2.903；P0.05），本研究得到医院伦理委员会批准，患者知情同意 1.2方法 1.2.1 PTPN22检验方法 采集患者的静脉血5 mL，EDTA抗凝之后，使用碘化钠法提取基因组DNA后保存备用。根据GenBank序列设计2对引物，特异性扩增FOXP3基因当中包含-3281C/3281A的DNA片段，取扩增产物2 L，37℃条件下孵育2 h，反应终止之后EB染色，染色之后使用凝胶成像判断结果[5] 1.2.2 转录因子FOXP3检验方法 采集患者的静脉血5 mL，EDTA（乙二胺四乙酸二钠盐）抗凝之后使用蛋白酶抽提法提取DNA，使用DNA电泳法以及紫外分光法定量定性检测之后保存备用。电泳酶切反应1858C/1858T位点的基因扩增产物，消毒双蒸水2 h之后存储在37℃的水浴箱过夜，酶切后产物进行凝胶电泳分析，电泳之后将凝胶放到EB液当中染色1 h之后观察拍照[6] 1.3统计学方法 读取个体样本之后计算基因型以及等位基因频率，确认是否符合平衡定律，对等位基因频率以及多态性位点的基因型频率进行检验[7]，数据用SPSS18.0软件分析，计数资料采用χ2检验，P 　　PTPN22在1号染色体当中，共有15个内含子以及16个外显子，编码酪氨酸磷酸酶（LYP）[15]。LYP集中分布在人体的淋巴细胞当中，由含有脯氨酸基序（C端）以及磷酸酶区域（N端）组成。在T细胞的活化步骤当中，借助于C端名为P1的氨酸基序同Csk结构相连接而发挥调节功能，使得磷酸化的酪氨酸激酶能够脱磷酸化从而丧失活性，抑制T细胞信号通路的激活，通过?@样的途径调节T细胞信号[16]。单核苷酸的变异会导致信号转导出现障碍，从而诱发免疫性疾病的出现以及恶化。相关研究的结果表明，截止到目前为止，亚洲地区还灭有出现基因位点出现变异的状况[17]。虽然该位点的研究数量比较多，不过主要为国外研究结果，同时实验的对象也主要是欧美白种人。当前国内研究人员在这一位点的研究大部分都同免疫甲状腺炎先关，同SLE有联系的研究比较少[18]。为进一步分析这一位点同SLE发病之间的联系，本研究选取SLE患者行了研究，结果并未检测患者当中存在T等位基因的变异。除此之外，我国其他研究人员的相关实验结果显示，CT基因型仅仅存在于锡伯族、蒙古族、赫哲族、回族、哈萨克族以及维族等少数民族当中[19]。本研究当中，我们研究基因启动子区域的-1123G/C位点同SLE发病之间的联系，结果表明该位点的3种基因型具体分布方面，研究组SLE患者以及对照组健康人群之间差异无统计学意义（P0.05），两组患者当中C等位基因频率也没有显著差异（P0.05）。因此可以认为该位点多态性同SLE发病之间不存在相关性 在PTPN22的基因多态性同狼疮性肾炎之间的关系方面，狼疮性肾炎可以说是SLE的常见并发症之一，发病同多种基因存在联系[20]。研究人员根据是否存在狼疮性肾炎分组研究例西班牙的SLE患者，结果并未发现PTPN22在不同患者之间的明显区别，因此认为PTPN22的多态性对狼疮性肾炎并无直接的影响，推测是因为自身免疫疾病发生的基因基础比较复杂，PTPN22出现只是基因变异比较微弱的组成部分[21]。PTPN22的基因多态性同自身抗体之间的关系方面，有研究人员认为在多发性硬化以及其他自身免疫疾病当中缺乏明确的证据，推测该基因在抗体产生过程当中有重要的影响[22]。当前已知存在三种不同的自身免疫疾病抗体同PTPN22有明确的联系，例如I型糖尿病患者的抗谷氨酸抗体、RA患者的抗心磷脂抗体以及RF患者的自身抗体，推测PTPN22的变异借助于易化疾病抗体而导致患者出现自身免疫疾病 国内研究人员采取同本研究类似的方法，研究自身免疫性的甲状腺患者，分析患者的位点情况，结果显示该位点在等位基因以及基因型的分布频率方面，同健康人对比存在明显差异，因此认为PTPN22启动子-1123G