不同中药配伍对关木通毒性成分马兜铃酸A含量的影响论文.docVIP

　　不同中药配伍对关木通毒性成分马兜铃酸A含量的影响论文 .freelonsilTM(钻石)C18（250mm×4.6mm，5μm）为色谱柱，以甲醇-水-冰乙酸(体积比74：24：1)为流动相，检测波长315nm，测定各组中马兜铃酸A的含量。【结果】与关木通组相比，龙胆泻肝汤全方中马兜铃酸A含量最低；关木通+滋阴组马兜铃酸A含量也有明显降低。【结论】在方剂配伍理论指导下.freelanshruiensisKom.的干燥藤茎，其主要化学成分为马兜铃酸A、B、D，马兜铃D甲醚，木兰花碱，齐墩果酸［1］。关木通苦寒有毒，有清心火、利小便、通经下乳之功效，用于口舌生疮、心烦尿赤、水肿、热淋涩痛、白带、经闭乳少、湿热通痹等。现代研究表明其药理作用有利尿、抗突变、抗肿瘤及降血压的作用［2］。 关木通含有损害人体肾脏的马兜铃酸，2003年6月国家食品药品监督管理局发出通知取消其药用标准，这意味着关木通从此不能作为一种合法中药使用。本文以历代应用最多的名方龙胆泻肝汤（LongdanXieganDecoction，LXD）为例，观察中药配伍是否能降低关木通毒性，从而验证方剂配伍理论的合理性。 龙胆泻肝汤出自《医方集解》，是泻肝胆实火、清下焦湿热的名方。主治肝胆实火上炎，肝胆湿热下注证。近几年来，国内外不断有报道服用龙胆泻肝丸导致肾损害，多与长期超量服用等不合理使用有关［3-5］。但龙胆泻肝汤应用数百年来却未见有不良反应，本实验采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法，观察龙胆泻肝汤及其拆方组对关木通中马兜铃酸A（adritolochicacid，AA)含量的影响，探索中药配伍降低关木通毒性的规律。 1仪器与试药 1.1仪器 戴安SummitP680高效液相色谱仪（美国DIONEX公司）；Chromeleon色谱工作站（美国DIONEX公司）；UVD170U紫外检测器（美国DIONEX公司）。 1.2药品 对照品马兜铃酸A由国家药品生物制品检验所提供（批号为：110746200406）；龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、当归、生地黄、车前子、柴胡、生甘草、玄参、麦冬均购自广州中医药大学第一附属医院中药房，关木通购于河北安国药材市场，经广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定为AristolochiamanshruiensisKom.。 1.3试剂 甲醇为色谱纯；冰醋酸、无水甲醇、盐酸、乙醚为分析纯，水为怡宝纯净水。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18（250mm×4.6mm，5μm）；检测器：UVD170U紫外检测器；检测波长：315nm；柱温：室温（25℃）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（体积比为75：24：1）；流速1mL/min，进样量5μL。 2.2样品的制备 根据《医方集解》注：龙胆泻厥阴之热，柴胡平少阳之热，黄芩、栀子清肺与三焦之热以佐之，泽泻泻肾经之湿，木通、车前子泻膀胱之湿以佐之，然皆苦寒下泻之药，故用归、地以养血而补肝，用甘草以缓中而不伤肠胃，为臣使也，将方中龙胆草、柴胡、黄芩、栀子归为清热药，将泽泻、车前子归为利水药，将当归、生地归为滋阴药。剂量按原方比例，分以下7组：关木通组：关木通3g；全方组：关木通3g，龙胆草2g，黄芩3g，栀子3g，泽泻4g，当归1g，生地黄3g，车前子3g，柴胡2g，生甘草2g；关木通+清热组：关木通3g，龙胆草2g，黄芩3g，栀子3g，柴胡2g；关木通+滋阴组：关木通3g，当归1g，生地黄3g；关木通+利水组：关木通3g，泽泻4g，车前子3g；关木通+甘草组：关木通3g，生甘草2g；阴性对照组：龙胆草2g，黄芩3g，栀子3g，泽泻4g，当归1g，生地黄3g，车前子3g，柴胡2g，生甘草2g。 取供试样品，加水400mL，浸泡30min，煎煮60min，用纱布过滤。药渣再加水100mL，煎煮30min，纱布过滤。合并2次滤液浓缩至50mL，吸取10mL，用6mol/L盐酸调至pH=2，转移至分液漏斗中，用乙醚萃取4次［6］（10mL，5mL×3）；合并萃取液，水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于10mL容量瓶中。通过0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。 2.3对照品溶液的制备 精密称取马兜铃酸A对照品适量，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成0.034mg/mL的溶液即得。 2.4线性关系考察 按照上述色谱条件测定，精密称取马兜铃酸A对照品溶液2.5、5、10、15、20μL，以峰面积为横坐标X，以进样量为纵坐标Y，绘制标准曲线，结果马兜铃酸的线性范围0.084～0.680μg，方程为Y=0.0446X－0.0173，R=0.9998（图1）。 2.5