不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定论文.docVIP

　　不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定论文 吴少杰，邢朝斌，劳凤云，赵宝瑞 【摘要】 目的建立刺五加中刺五加苷E含量的测定方法，并比较不同产地的刺五加中刺五加苷E含量，为进一步研究不同品系的刺五加中刺五加苷E的含量与其遗传学的关系奠定基础。方法刺五加苷E的提取采用超声提取法;选用YMC ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm,.freel)，检测波长220 nm，以0.1%磷酸水溶液-乙腈(89∶11)为流动相.freell/min。结果超声波提取法对刺五加苷E提取率稍低于溶剂提取法，但操作简便，耗时较短。刺五加苷E的线性范围为0.625～10.004 μg(r = 0.999 92);平均回收率为100.64%，RSD为2.97%。结论建立的刺五加苷E提取和测定方法适合于快速准确地分析大量样品。 【关键词】 刺五加; 刺五加苷E; 高效液相色谱法 Abstract：Objective To establish a method for determination of Eleutheroside E content in Eleutherococcus senticosus from different provenances, ethod ination conditions n (150 mm×4.6 mm, 5 μm), obile phase, l/min, and UV detect . ResultsAs pared ethod, supersonic extracting method e-saving, despite its slightly loination method is suitable for the precisely analysis of Eleutheroside E. Key .) Harms。 1.3 试剂磷酸(天津市微通化学试剂有限公司)，色谱纯乙腈(天津市四友生物医学技术有限公司出品，高效液相色谱专用)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 YMC ODS液相色谱柱 (150 mm× 4.6 mm, 5 μm);柱温30℃，检测波长220 nm，体积流量1.0 ml/min，流动相为0.1 %磷酸水溶液-乙腈(89∶11)。此条件下，样品中刺五加苷E与两侧相邻色谱峰的分离度分别为2.94和2.98，分离效果良好;对刺五加苷E分离的理论塔板数为2.14 × 104，色谱图见图1。*- 刺五加苷E图1 刺五加苷E对照品(A)和刺五加(B)的HPLC图 2.2 对照品溶液配制精密称取0.5 mg对照品，用50%甲醇定容至10 ml，于4℃冰箱中保存。精密吸取一定量上述溶液置于另一10 ml容量瓶中并用50%的甲醇定容;按照此方法依次配制不同浓度的的刺五加苷E标准溶液。 2.3 样品处理与刺五加苷E的提取刺五加植株洗净，根和茎分开，阴干后将根和茎分别切成薄片，置于烘箱中60℃烘干至恒重后粉碎，粉末过20目筛。实验比较了两种提取方法——回流提取法和超声提取法：精确称取刺五加根和茎的粉末2.5 g各2份，一份用50%的甲醇溶液85℃回流提取2 h后过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干，残渣用50%甲醇溶解转移至10 ml容量瓶中定容;另一份超声(频率40 kHz，功率100 in，然后过滤、滤液蒸干并按同法配成溶液。HPLC测定刺五加苷E的含量。通过比较，发现二者提取效果相差不大，但由于超声提取法速简便，因此本研究采用超声提取方法。 2.4 线性关系考察精密吸取不同浓度的对照品溶液20 μl，HPLC测定刺五加苷E的峰面积。采用Origin 7.0数据处理软件，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，得到直线拟合方程为 Y = 1 920.529 25 X + 250.707 22，r = 0.999 92，在所测量的范围内(0.625～10.004 μg)，线性关系理想。 2.5 精密度实验 精密吸取刺五加苷E的对照品溶液20 μl，连续进样5次，测定其峰面积;得到RSD为1.02%，精密度良好。 2.6 稳定性实验 精密吸取刺五加根样品(本溪产)溶液20 μl，每隔2 h进样1次，连续测定6次，测定刺五加苷E的含量，计算RSD= 1.07%，表明在10 h内刺五加苷E稳定性良好。 2.7 重复性实验精密称取1.0 g刺五加根(本溪产)粉末6份，按“2.3”中超声提取法制备供试品溶液。测定结果的RSD为2.03%，重复性较好。 2.8 加样回收率实验精密称取1.0 g刺五加茎(本溪产)粉末5份，精密加入一定量刺五加苷E对照品，然后按照“2.3”中超声提取法制备供试品溶液。经测定，平均回收率为100.64%，RSD= 2.97%，回收率较好。 2.