马铃薯快速繁殖实验报告 (2).docVIP

本科学生综合性实验报告 学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验课程名称 马铃薯快繁和移栽 教师及职称 开课学期 2012 至 2013 学年 下 学期 填报时间 2013 年 6 月 日 云南师范大学教务处编印 实验序号 实验二 实验名称 马铃薯快繁和移栽 实验时间 2012.03.15—2012.06.26 实验室 生科院组培实验室325 实验内容 1 MS培养基母液和常用试剂的配制 2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 3 马铃薯试管苗的快速繁殖 4 马铃薯试管薯的诱导 5马铃薯幼苗的移栽 一 实验目的 1.通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 2.通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。 3.熟悉马铃薯快繁培养基及试管薯诱导培养基的配置方法。 4.通过本次实验，进一步掌握无菌操作技术。 5.了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。 6.熟悉移栽的过程和原理。 7.掌握马铃薯幼苗移栽的技术和操作方法。 二 实验原理、实验流程或装置示意图 实验原理 (1)作为植物营养繁殖的一个新手段，组织培养技术现正日益普及。利用植植物离体繁殖(propagatin in vitro)。植物离体繁殖又称植物快繁或微繁(micrpropagation)，植物快繁与传统营养繁殖(vegetative prpagation)相比，其特点表现在：①繁殖效率30m2的培养室可同时存放1 （3）马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程 三 实验设备及材料 1.实验设备 果酱瓶、500mL搪瓷杯、三角瓶、烧杯、容量瓶、玻璃棒、25mL量筒、1mL和5mL移液管、洗耳球、PH试纸、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电子天平、酒精棉球、小块纱布、灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、冰箱、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、记号笔。 2.药品和试剂 （1）母液配制： 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA 、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水、75% 酒精等。 马铃薯快速繁殖培养基及诱导培养基的配制： 事先配好的MS基本培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH等。 3.实验材料：马铃薯脱毒苗 四 实验方法步骤及注意事项 实验步骤： （一）MS培养基母液和常用试剂的配制与保存 1.大量元素母液的配制 MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外，剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 ? 2H2O、MgSO4 ? 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中（具体配制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。 注意： CaCl2 ? 2H2O最后加入 母液 种类 成分 规定 用量/mg.L-1 浓缩倍数 称取量/mg 母液定容体积/mL 配1L MS培养基吸取量/mL 大量元素 KNO3 1900 20 38000 1000 50 NH4NO3 1650 33000 CaCl2.2H2O 440 8800 MgSO4.7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 2.微量元素母液的配制 MS培养基中的微量元素可由MnSO4?4H2O、 ZnSO4?7H2O、 H3BO3、 Na2MoO4?2H2O、KI、 CuSO4?5H2O、 CoCl2?6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在同一母液中（具体配制见下表）。配制步骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。 母液种 类 成分 规定用量/mg.L-1 浓缩倍数 称取量/mg 母液定容体积/mL 配1L MS培养基吸取量/mL 微量元 素 MnSO4．H2O 16.9 200 3380 1000 5 ZnSO4.7H2O 8.6 1720