参龙煎剂对肺纤维化肺组织形态学影响的实验研究论文.docVIP

　　参龙煎剂对肺纤维化肺组织形态学影响的实验研究论文 .freelg/kg）、参龙煎剂低剂量组（生药量0.675g/ml）、参龙煎剂中剂量组（生药量1.2g/ml）、参龙煎剂高剂量组（生药量2.4g/ml）。按照BLM5mg·kg－1体重复制大鼠肺纤维化模型。24小时后给药，观察各实验组7天、14天、28天肺组织病理形态表达情况的变化。结果：参龙煎剂治疗后模型大鼠肺部炎症浸润情况减轻、肺泡破损减轻、胶原沉积减少。结论：结果表明，证实了参龙煎剂能够改善肺纤维化的异常组织结构，使延缓肺纤维化的病程成为了可能。 【关键词】 肺纤维化 HE染色 Masson染色 肺纤维化是一组病因各异、表现相似的疾病谱，其病理主要表现为早期的炎症细胞浸润、肺组织损伤，晚期的细胞外基质及胶原沉积和肺组织结构的重塑1。许多研究表明，肺纤维化初期肺组织病理学改变以肺炎症浸润为主，大量的炎症细胞浸润.freelg/支。参龙煎剂：辽宁中医药大学附属二院制剂室制备，主要成分由黄芪、沙参、当归、川芎、熟地、地龙、甘草等中药组成。醋酸泼尼松片：国药准字产品批号051108。5mg/片，天津天药药业股份有限公司。 1.3 主要试剂及仪器 万能显微镜（日本 OLYMPUS 公司）BI-2000图像分析系统（成都泰盟科技有限公司）；HE染色、Masson染色试剂（中国医药上海化学试剂公司）。 2 实验方法 2.1 动物模型制备 参照Szapiel4方法，将大鼠麻醉，暴露气管，一次性注入BLM注射液（5mg·kg－1），左右旋转鼠板，使BLM注射液均匀分布于两肺，制成模型。 2.2 实验动物分组及给药方法 实验动物按雌雄、体重分层随机分为6组，每组36只，每天灌胃一次，每周复查体重，调整给药量。共饲养4周，分别于7天、14天、28天3个时间点取材，每次处死12只动物。分组：正常对照组、模型组、泼尼松组（5.4mg/kg）、参龙煎剂低剂量组（生药量0.675g/ml）、参龙煎剂中剂量组（生药量1.2g/ml）、参龙煎剂高剂量组（生药量2.4g/ml）。正常组、模型组建模后第2日起每日予以1ml/kg生理盐水灌胃。其余各组按配好的药品以等容药品灌胃。 2.3 标本的制备 腹主动脉放血至死，剖开胸腔和颈部，分离气管和肺脏，取下肺叶，用冰盐水洗去血渣，剔除结缔组织，滤纸吸干。称重后，同时结扎右主支气管，从肺门部离断，右肺上叶用定量输液泵小心灌入含有1/1000DFFC4%多聚甲醛溶液在25cmH20压力下进行灌注固定，切成1.5×1.5×1cm3大小，30分钟后投入多聚甲醛溶液固定一周。取固定好的组织，在横颈最大处3mm后组织片，常规脱水，二甲苯透明，用自动石蜡包理机。切面4um的切片。备做HE、MASSON染色、光学显微镜下观察。 2.4 病理形态学定量分析 用BI-2000图像分析系统对HE染色病理切片进行光密度（OD值）测定。扫描时将切片分为3个区域：肺泡腔内无组织结构，OD值最低，定为无染区，其面积代表肺泡腔的面积；细胞核的OD值最高，定为深染区，其面积反映炎症细胞浸润程度；细胞外基质和炎症渗出染色较细胞核浅，HE切片中为粉色或浅粉，定为浅染区，与肺泡炎阶段炎性水肿和渗出的区域基本一致，在模型晚期其面积主要反映细胞外基质沉积程度。将切片置于图像扫描分析仪显微镜下，在放大200倍条件下，每张切片分别从四周和中间随机选5个视野，测定深染区、浅染区和无染区所占的面积。 2.5 利用HE染色的病理切片，确定肺泡炎等级判定方法 病变程度确定根据Szapiel等4的方法确定肺泡炎和肺纤维化的程度。利用HE染色的病理切片将肺泡炎分为四级：（－）无肺泡炎；（+）轻度肺泡炎，单核细胞浸润面积＜20%，结构正常。（++）中度肺泡炎受累面积＜20%～50%。（+++）重度肺泡炎，受累面积＞50%。 2.6 利用Masson氏三色染色的病理切片，确定肺纤维化等级判定方法 根据Szapiel等4的方法，分为四级：0级：无肺间质纤维化（－）；1级：轻度肺间质纤维化（+），病变范围局限在全肺20%以下；2级：中度肺间质纤维化（++），病变范围占全肺20%～50%，肺泡结构紊乱。 2.7 统计学方法 统计数据应用SPSS11.0统计软件单因素方差分析（one ASSON染色中造模各组肺间质、支气管壁和肺泡隔胶原染色中胶原纤维明显增多，以模型组最多。7天时胶原纤维主要分布于细小支气管及小血管周围，肺泡间质散在的胶原纤维，胶原纤维较短，尚未形成片状及束状；14天时，小气管、小血管胶原纤维明显增多，支气管偶见少量束状胶原纤维，肺间质胶原纤维呈束状或小片状分布；28天时，支气管、小支气管、小血管大量胶原纤维环绕，周围胶原增生并向肺间质延伸在间质沉积，呈片