家兔助孕模型的研究论文.docVIP

　　家兔助孕模型的研究论文 .freel culture in three different culture media and find out the correlation bet. Methods The semen edia placed in a culture machine perature oilluminance system .Results In all the three cultural media the motility of the sperm remained the same at 24 hours. At 48 and 72 hours，hootality differed in B199 at 24，48 and 72 hours. After the injection of PMSG，7.8 eggs and 6.6 embryos each rabbit on average. After the injection of HMG，an average of 15 eggs and 25 embryos ained almost the same.Conclusion BG leads to more superovulation than PMSG does. The intramuscular injection of HMG or PMSG correlates . 【Key en；gonadotrophin；superovulation；reproductive hormone 人类对于动物生殖的调控能力，是随着对动物生殖生理认识、了解的增加以及相关学科的发展而逐渐提高的［1］。选择优良的精子既能显著提高繁殖率，又能节省高昂的费用。为了选择有效、方便、经济的培养基，笔者对B199培养基进行了对比实验研究。 超数排卵是胚胎生物工程中一个重要环节。本研究对雌性新西兰大耳白兔肌肉注射孕马血清促性腺激素（PMSG）或尿促性腺激素（HMG）进行超数排卵［2］，并以获取的卵子数和胚胎数为指标，分析使用这两种促性腺激素的超排结果，同时记录回收卵、回收胚的最佳时间，为体外授精、胚胎的获取和植入提供临床依据。 使用不同超数排卵药物后雌兔生殖激素水平变化的报道甚少。本研究在超排结果研究的同时进行了雌兔使用HMG或PMSG前后血清FSH、LH、E2-6、P和T的测定，以了解超数排卵药物对生殖激素水平的影响以及生殖激素与超数排卵的关系。 1 材料与方法 1.1 家兔精子培养基的筛选 1.1.1 材料 新西兰大耳性成熟兔，由第三军医大学实验动物中心提供，雄兔体重3.4±0.4kg，雌兔体重3.2±0.2kg，分笼饲养。 1.1.2 方法 采用假阴道法采集精液，精液放入37℃恒温水浴箱中，液化，分成三份，分别加到2ml的B199培养基中，37℃爬高30min，取上清液、离心，用三种各自的培养基洗涤两次取沉淀物，精子浓度调为10×106/ml，37℃培养，分别在24h、48h和72h离心、换液，制备细胞悬液，镜下观察精子活率和活力。 1.2 家兔超排、卵及胚胎的回收、囊胚的植入 1.2.1 材料 新西兰大耳白雌兔（来源同1.1.1）40只，兔龄6～12月。实验前随机分成两组，Ⅰ组10只，PMSG超排。Ⅱ组30只，HMG超排。雄兔6只，都具有生育力（其中2只结扎，用于假孕兔诱导排卵），另外4只有过生育史的雌兔作受体兔。 1.2.2 方法 1.2.2.1 超排处理 采用两种方法，一种为PMSG+HCG法，每次实验选Ⅰ组2只发情雌兔，每天肌肉注射PMSG (75u)1次，连续2天，第3天肌肉注射HCG 80u，立即与雄兔合笼交配。其中1只用于取卵（与结扎雄兔合笼），另1只用于取胚。另一种为HMG+HCG法，每次实验选Ⅱ组4只发情雌兔，分别每天肌肉注射HMG (20u)1次，连续2天，第3天肌肉注射HCG 80u，立即与雄兔合笼交配。其中2只用于取卵（与结扎雄兔合笼），另2只用于取胚。 1.2.2.2 卵子的回收 分别将合笼后15h的Ⅰ组和Ⅱ组实验兔处死。剖腹取出双侧卵巢、输卵管、子宫、阴道组织。用文镊固定提起后，观察卵巢表面的卵泡发育情况，用钝性针头吸M199液，通过输卵管伞端，轻轻加压推入液体，慢慢冲洗输卵管和子宫，经阴道将卵泡回收到平皿中，静置，解剖显微镜及相差显微镜下记录回收卵子数，再放入M199培养基中，加灭菌石蜡油，37℃培养观察。 1.2.2.3 囊胚的回收 Ⅰ组和Ⅱ组实验兔合笼，96～106h处死，剖腹取胚，通过输卵管伞端和子宫角，用杜氏液冲洗，经阴道回收冲胚液，静置，肉眼检胚，显微镜观察，照相。 1