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　　宽叶缬草醚酯提取物体外抗氧化活性研究论文 黄凌，黎继烈，杨杰，崔培梧，文蓉 【摘要】 目的探讨缬草醚酯提取物体外抗氧化活性。方法采用DPPH法、邻苯三酚自氧化法、水杨酸法，分别测定缬草醚酯提取物清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的能力。结果样品中活性物质对于DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基等自由基半清除率浓度(IC50)分别为1.36，1.46和2.14 mg/ml。结论在实验条件下，缬草醚酯提取物对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子有较好的抑制作用。 【关键词】 宽叶缬草; 自由基; 抗氧化活性 Abstract：ObjectiveTo study the antioxidant activity in vitro of ether and grease extract from Valeriana offeinalis L.Methods The methods of DPPH , pyrograllol auto-oxidation and salicylicl acid ethanol extract of Valeriana offeinalis L . ResultsThe half maximal inhibitory concentration(IC50) of sample on DPPH· , O2-· and OH· g/ml . ConclusionThe extract has good scavenging effect on DPPH·, OH· and O2-· under the condition of experiment. Key l蒸馏水于高速捣碎机中粉碎后移入1 000 ml三角瓶中超声处理20 min。 加入300 ml乙醚、醋酸乙酯混合液(1∶1)于三角瓶中，于25 ℃下振荡萃取2 h(密封)。抽出上层混合液，真空浓缩至膏状取出，冷冻干燥。所得膏状物用无水乙醇复溶于50 ml容量瓶制成20.0 mg/ml样品溶液，于4 ℃温度下保存备用。 1.2 仪器UV-1700型紫外分光光度仪(日本 岛津上海有限公司);R201D-Ⅱ型旋转蒸发仪(郑州 长城科工贸有限公司);JJ-2B型电动高速捣碎机(江苏 荣华仪器制造有限公司);AS 2060B型超声清洗器;FD-1A型冷冻干燥机(北京 博医实验仪器公司)。 1.3 试剂1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)(Sigma 公司);抗坏血酸、茶多酚、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、邻苯三酚、水杨酸、硫酸亚铁、无水乙醇、乙醚、醋酸乙酯、浓盐酸、双氧水(30%)等均为国产分析纯。 2 方法 2.1 缬草醚酯提取物清除DPPH·自由基能力测定DPPH自由基清除实验参照彭长连等5方法，并依据缬草提取物成分特性对具体操作做出改动。DPPH溶液的配制：准确称取19.70 mg DPPH用无水乙醇溶解并定容于250 ml容量瓶中，DPPH浓度为2.0 × 10-4 mo1/L，避光保存(0 ～ 4℃)。 取样品溶液2.0 ml稀释10倍后移入25 ml三角瓶中。分别移取200，400，600，800，1 000 μl稀释液于试管中，用无水乙醇补足到2.0 ml后编号。每支试管各加入2.0 × 10-4 mol/L DPPH溶液2.0 ml均匀混合，在28 ℃下避光静置30 min。以无水乙醇调零，于λ516测定其吸光度A。空白对照组采用无水乙醇替代DPPH溶液，其他试剂与样品组相同。各组实验组均做3次平行，取均值。DPPH·自由基清除率按下式计算。 清除率(%)=A0-(A1-A1)A0×100% 式中：A0 ——2.0 ml乙醇加2.0 ml DPPH溶液的吸光度; A1 ——2.0 ml样品溶液加2.0 ml DPPH溶液的吸光度; A1——2.0 ml样品溶液加2.0 ml乙醇的吸光度。 2.2 缬草醚酯提取物清除羟基自由基(OH·)能力的测定利用Fenton反应法产生OH·，OH·与水杨酸反应产生有色物质，该产物在λ510有强吸收峰。若体系中加入清除OH·的物质，则会减少有色物质生成，吸光度降低6,7。具体操作为：取样品溶液2.0 ml稀释10倍后移入25 ml三角瓶中。分别移取400,600,800,1 000 ,1 200 μl稀释液于试管中，用无水乙醇补足到2.0 ml后编号。每支试管各加入1.0 × 10-2 mol/L FeSO4 l.0 ml，1.0 × 10-2 mol/L水杨酸-乙醇溶液2.0 ml，最后加入30% H2O2 2.0 ml启动反应，于室温下反应1 h。以蒸馏水调零，测λ510样品的吸光度。考虑到试剂与提取物溶液的协同增色效应，以蒸馏水2.0 ml替代30% H2O2