小鼠腹水型肝癌高淋巳道转移瘤株Hca-F 的再克隆 ... - 大连医科大学学报.PDF

第 25 卷第 1 期 大连医科大学学报 Vol.25 No.l 2003 年3 月 Joumal of Dalian Medical University Mar.2003 小鼠腹水型肝癌高淋巳道转移瘤株 Hca-F 的再克隆技术 白洁1 王波2 侯力2 李莹2 凌茂英2 吕中2 ， 3 白颖4 (1.大连医科大学美容医学院基础教研室，辽宁大连 116027;2. 大连医科大学基础医学院病理学教研室，辽宁大连 116027; 3. 大连医科大学第二临床学院实验中心，辽宁大连 116027; 4 大连华洋科学仪器有限公司，辽宁大连 116017) 摘要: [目的]探讨小鼠腹水型肝癌高淋巳道转移瘤株 Hca- F 的再克隆技术。[方法]采用有限稀 释法对已使用多年的小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移瘤株 Hca 一 F 进行再克隆;615 小鼠皮下接种， 检测再克隆瘤株淋巴结转移能力。[结果]共分离出 3 个不同的瘤株，Hca - F - 2 - 24c6 ,Hca - F - 3 - d4 ， Hca 一 F-3 -a4 ，流式细胞仪检测证明 3 株瘤细胞均为单克隆细胞。动物实验证明三株瘤 细胞淋巳结转移率分别为 95.5% ,87% ,42.5%0 [结论]有限稀释法操作简单，克隆的形成率高。 关键词:淋巴道:肿瘤转移;有限稀释法 Afresh clone of small rat of ascites type Iiver cancer high Iymph path transfer tumour individual plant Hca - F Key words :lymph path; tumour transfer; finitary dilute method 中固分类号:R73 -3 文献标识码:B 文章编号:1671-7295(2003)01- 0065 - 02 Hca-F 是小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移单克 第 4 天，无菌条件下抽出新生腹水备用。 隆瘤株，可用于肿瘤淋巴道转移机制的研究及抗肿 1.2.2 制备饲养细胞:取正常 615 小鼠断颈处死， 来苏儿消毒，放人己消毒的蜡版上仰面固定好;用消 瘤药物的筛选。但近来研究中发现此瘤株的淋巴结 毒的剪刀剪开小鼠腹部皮肤，暴露出腹膜，用注射器 转移率不够稳定，考虑到肿瘤的遗传不稳定性，因此 抽取 2-5 mL 的培养液注人小鼠的腹腔，用玻璃棒 需对其进行重新克隆，以使此瘤株得到纯化，表达出 稳定的高淋巴道转移表型。 在小鼠背部上下滑动;然后用消毒眼科剪在腹膜上 剪一小口，用吸管吸出平均分到 96 孔塑料板(微量 1 材料和方法 滴定板)中待用。 1.2.3 有限稀释法克隆 Hca - F: 清洗已制备的腹 1. 1 材料 1.1. 1 瘤源:小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞系 水瘤细胞，记数，用培养基稀释瘤细胞悬液至 50/ Hca- F，由大连医科大学病理学教研室凌茂英教授 mL。然后，加培养液至 10 mL，打匀后，分散到己制 克隆并冷冻保存[1]。 备饲养细胞的 96 孔塑料板内，每孔平均只