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华北农学报 ·2 0 1 1 ,2 6 (5 ):9 2 -9 6
牡丹SCoT 分子标记正交优化及引物筛选
1 1 1 2 2 3
, , , , ,
侯小改 王 娟 贾 甜 张钰乾 侯 娟 李嘉珏
(1. , 471003 ;2. , 471003 ;3. , 471011)
河南科技大学农学院 河南洛阳 河南科技大学林学院 河南洛阳 中国洛阳国家牡丹基因库 河南洛阳
: DNA , L (45 ) -
摘要 以牡丹基因组 为模板 采用 16 正交试验设计对影响目标起始密码子多态性 聚合酶链式反应
(SCoT-PCR) (Taq 、Mg2 + 、 DNA 、dNTPs ) ,
的五因素 酶用量 浓度 模板 用量 浓度和引物浓度 进行优化试验 建立了优化的
SCoT-PCR :Mg2 + 2 . 50 mmol / L 、dNTPs 0 . 25 mmol / L 、 0 . 60 mol / L 、Taq DNA 0 . 50 U 、
牡丹 反应体系 引物 μ 聚合酶 模板
DNA 1. 00 ng / L ,1 × PCR-Buffer , 20 . 00 L 。 , Mg2 + ,
μ 总体积 μ 比较各因素对扩增反应的结果 其中以 浓度的影响最大
DNA 。 17 , 36 SCoT
模板用量的影响最小 运用牡丹 个品种验证了该体系稳定可靠 并从 个 引物中筛选出扩增条带清
、 24 。 SCoT
晰 多态性丰富的 个引物 这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用 标记技术对牡丹进行相关研究
提供了科学依据。
: ;SCoT-PCR ; ; ;
关键词 牡丹 反应体系 正交设计 引物筛选
中图分类号:S567 . 03 文献标识码:A 文章编号:1000 - 7091 (2011)05 - 0092 - 05
Orthogonal Optimization of SCoT-PCR System and
Primer Screening of Tree Peony
1 1 1 2 2 3
HOU Xiao-gai ,WA
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