第二章 动物外周血淋巴细胞分离液KIT说明书-Solarbio.PDFVIP

Beijing Solarbio Science Technology Co., Ltd Tel: 010 Solarbio Fax: 01082 Http:// 大鼠外周血单个核细胞分离液试剂盒 规格：3×200mL/kit 保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。无菌开封后，保存于室温。 组成： 各种动物外周血单个核细胞分离液 200mL 全血及组织稀释液 200mL 细胞洗涤液 200mL 产品简介： 本产品是一种用于分离动物外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据 血细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将单个核细胞从外周血中分离出来。 适用于从动物抗凝血液中分离单个核细胞，无菌条件下分离的单个核细胞可用于培养。 本品仅供科研使用。 操作步骤： 1. 取新鲜抗凝全血 （EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液 或者PBS稀释全血。 2. 在离心管中加入适量分离液 （当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL，加入等体积 分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离 液液面上方，注意保持两液面界面清晰。 （可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液 上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层 界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之 前出现红细胞成团下沉属正常现象。） 3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血 液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越 长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不 超过1200g）。 水平离心 血浆层 4. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血 单个核细胞层 浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液 分离液层 之间的白膜层即为单个核细胞层，离心管底部 红细胞层 是红细胞与粒细胞。 分离前 分离后 5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管 中， 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。 6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。 1 2 第 页 共 页 7. 重复步骤6 8. 弃上清，细胞重悬备用。 注意事项： A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。。 B. 分离液使用时应始终保持室温 （18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条 件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C. 血液样本最好为新鲜抗凝血 （采血2h以内），为保持单个核细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。 D. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞 得率及纯度。