遗传学报，9(S)375-380，1982.PDFVIP

遗 传 学 报， ，(5);375--380,1982 ActroCeneticaSinica 金鱼乳酸脱氢酶的同工酶 的发生遗传学研究 I.螂鱼和红龙睛金鱼各组织器官 乳酸脱氢酶的同工酶的比较 罗莉中 毕世华 王春元 （中国科学院遗传研究所，北京） 本研究以螂鱼和红龙睛金鱼为材料，对肾脏、心脏、肝脏、脾脏、脑、眼、卵和肌肉等8种组 织器官分别进行了乳酸脱氢酶(LDH）同工酶的分析比较。结果表明，不同组织中LDH的同工 酶谱带是不相同的，存在着组织特异性。但鳃鱼与红龙睛金鱼同一组织器官的LDH的同工酶 谱带则基本相同，这在一定程度上为金鱼是由鳃鱼进化而来的推论提供了依据。 乳酸脱氢酶(LDH）是一种结合蛋白，其辅酶是辅酶I(NAD)，在生物机体内，它可以 催化乳酸脱氢成为丙酮酸，从而完成葡萄糖的无氧酵解过程。Kaplan141等认为LDH在生 物体内的基本功能是调节 NAD和还原型辅酶I(NADH）的比率，从而对细胞内一系列 生化反应起调控作用。 同工酶是1957年在电泳分离乳酸脱氢酶时发现的Lzl。自五十年代以来，利用同工酶 的分析来研究细胞分化过程中基因的作用机理以及生物群体的遗传进化规律，已引起了 人们广泛的兴趣，开展了许多方面的研究工作。在鱼类方面，利用 LDH 同工酶进行发 育遗传学方面的研究工作，已有过不少的报道。Lush和Cowey等51〔,Massarotb},Wilson和 Whitt等，3以及Markert和Faulhaber17］等分别以扁平鱼、蛙鱼、金鱼以及各种海水鱼为材 料，对它们各组织器官的LDH同工酶进行了分析，结果表明，在鱼类中LDH广泛而大量 地存在着，并且有较多的同工酶。在不同种属的鱼类及同一个体鱼中的不同组织器官里， LDH同工酶的数目和活性有很大的差异。 目前从研究鱼的LDH同工酶的图谱中已找 到了1-20条不同的谱带M［。由此可见，同工酶可以作为各组织器官特异性的重要标志， 是基因的生化表现型。此外，利用同工酶在各物种、种群上的特异性表达进行生物分类 的研究，也是对传统的分类学的重要补充。因此，开展LDH同工酶的研究在生物学上具 有重要的意义，它是生化遗传学以及发育遗传学的基础工作之一。 我们进行了红龙睛金鱼和卿鱼的LDH同丁酶的分析比较，其目的在于了解这二种鱼 各组织器官的同工酶谱以及它们之间的酶谱异同，为探讨0鱼、红龙睛金鱼的亲缘关系， 以及各器官组织中的组织特异性提供依据。 本文于 1981年8月1日收到。 376 遗 传 学 报 9卷 材 料 与 方 法 试验取1-2龄，体重为31.5--83.5克的红龙睛金鱼和年龄为2-3龄，体重为74-133 克的Nrl鱼为材料。红龙睛金鱼从北京天坛公园养鱼场购得，a鱼则从北京市水产公司万 泉庄鱼场购得。在冰浴上将鱼解剖，摘取心脏、肾脏、肝脏、脾脏、眼、脑、卵、肌肉 取（自鱼 背部）等8种新鲜组织，分别置于冷的磷酸盐缓冲液 p（H7,O.1M）中剪碎，放人玻璃匀 浆器中匀浆化，所用缓冲液比例是1:5重（量／体积），各组织间的重量一般在。.2-0.4克 之间。所取新鲜材料用0℃的冷磷酸盐缓冲液或生理盐水洗去组织上所带的血液，组织匀 浆在冰浴中进行，将匀浆好的粗提液在 60℃水浴中加热1分钟，使粗提液的温度达到 560C，立即放回冰浴中继续保持冷却 加（热的目的是使许多不需要的蛋白质团聚，以便离 心除去，有利于LDH同工酶的纯化。加热处理的样品的电泳谱带比未经处理的样品的 电泳谱带清晰），然后在4℃下，在45,00吃离心30分钟，所得清亮的上清液即可用于垂直 平板淀粉胶电泳。我们使用的淀粉胶是自己水解的，水解的方法是把马铃薯淀粉 浙（江菱 湖淀粉厂出品，生化试剂）用浓盐酸和丙酮在恒温(380C）水浴中水解，水解的时间为30分 钟 水（解的时间要根据所使用的不同厂家出品的马铃薯淀粉而定）。水解到预定的时间 后，加入醋酸钠终止反应，然后用无离子水洗去酸，再用无离子水浸泡过夜，滤去无离子水 后，用少量丙酮淋洗，