粪菌移植对炎症性肠病大鼠血清TNFα、IL8的影响--培训课件.pptVIP

研究生：蔡景融 导 师：武华教授 2015年4月 粪菌移植对炎症性肠病大鼠血清TNF-α、IL8的影响 专 业：普通外科 研究方案 研究基础 研究计划 及预算 国内外研究 进展 选题依据 Content 粪菌移植对溃疡性结肠炎 大鼠血清TNF-α、IL8的影响 选 题 依 据 溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和患病机制还未完全阐明，可能与微生态环境、黏膜的免疫应答、应激、遗传等因素有关的慢性肠道炎症性疾病，病变主要局限于结直肠粘膜及粘膜下层，可累及整个结肠甚至末端回肠。目前研究发现，与健康人相比，UC患者肠道中微生物的多样性减少约1/4，拟杆菌门与厚壁菌门在总菌群中所占比例明显减少，而放线菌门与变形菌门的比例明显增加。肠道菌群是机体一个特殊器官，其调节机体免疫、调控炎症、参与物质代谢等方面发挥重要作用。 选 题 依 据 粪菌移植（fecal microbiota transplantation，FMT），是将健康人粪便中的功能菌群移植到菌群分布异常的患者胃肠道内，重建其健康的菌群分布结构，实现肠道及肠道外疾病恢复的一种治疗方式。现阶段，FMT研究大部分是关于FMT治疗复发性难辨梭状芽孢杆菌感染（CDI）和炎症性肠病（IBD）的个案或系列病例报道,但FMT导致患者肠道菌群具体发生何种有益变化及其潜在的机制仍不完全清楚，但有待进一步研究。对常规治疗失败或有手术禁忌证的UC病人，FMT或许是不错的选择。 肠道菌群的生理作用 1.防御病原体的侵犯 2.物质代谢作用 3.生长与衰老 4.合成维生素 5.肠道的生物、免疫屏障作用 选 题 依 据 传统的升阶治疗方案，序贯地应用5-氨基水杨酸、糖皮质激素与免疫抑制剂，无疑最为安全易行、经济实用；然而无限期地等待疗效，可能错失治疗良机，延误缓解时间，使约50％患者仍处于活动状态，导致失用或致残的并发症，其疗效费用比反而降低。随着新药问世后治疗经验的积累，专家们提出早期、强力治疗，即降阶治疗方案。这种看似昂贵、危险，实则经济、高效的治疗方法已使相当多的IBD患者获益，但降阶治疗药物昂贵，又有一定风险，如严重感染、药物反应等，对非选择性病例也存在过度治疗之嫌，而且停药或减药后病情仍会发复发作，并表现出一定的激素依赖性。对常规治疗失败或有手术禁忌证的UC病人，FMT或许是不错的选择。 目前FMT应用最为广泛的是治疗复发性难治性难辨梭状芽胞杆菌感染(CDI)肠炎，其短期缓解率可达90％以上。FMT也在其他多种疾病中被用于试验性治疗，都取得了良好的效果，如IBD、IBS、肥胖、代谢综合征、糖尿病等。还有FMT被成功运用于系统性硬化病、帕金森病、慢性疲劳综合征和特发性血小板减少性紫癜等的个案报道。 国 内 外 研 究 进 展 1 检测指标及意义 3 实验方案 2 创新之处及可行性分析 4 研 究 方 案 研究目标和内容 研究目标和内容 1 溃疡性性结肠炎大鼠模型建模成功评判标准 研究内容 拟解决的关键问题 1 2 3 研究目标 粪菌移植对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α、 IL-8的影响 实验分组、建立溃疡性结肠炎的大鼠模型 粪菌液的制备 指标检测、 Chiu氏6级评分法评估损伤程度 （1）分组情况 （2）模型建立 （3）粪菌液的制备 （4）指标检测 （5） Chiu氏6级评分法评估损伤程度 （6）统计学分析 2 实验方案 2.1分组情况 健康SD大鼠54只，雌雄各半，体重200-250g，由山西医科大学生理实验室提供。随机分成3组：空白对照组(A组)、模型对照组（B组）、粪菌液模型组（C组），每组18只。其中A组为正常大鼠，给予无菌生理盐水保留灌肠，每天一次，自由饮水、进食。B、C两组为溃疡性结肠炎模型大鼠，分别给予无菌生理盐水、粪菌液保留灌肠，每天一次，自由饮水、进食。（生理盐水量、粪菌液量按体重换算） 2.2模型建立 大鼠造模前1 d禁食24 h，不禁水，称重后，3％的戊巴比妥（1ml/kg）腹腔注射麻醉，5％2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS W/V)按100 mg/kg加入等体积50%乙醇溶液；体位为头朝下，用聚丙烯管插入肛门上段8 cm，注射器注人。再倒立1～5 min左右，以防药液溢出，一次性灌肠。 2.3粪菌液的制备 粪菌液制备流程：①将约5g供体（A组）新鲜粪便样本置于搅拌器中，加入25 mL无菌0．9％NaCl溶液进行初步均质加工；②将粪便浆体经不锈钢滤网过滤去除其中的大颗粒物质；③2 h内将样本在氮气生物工程厨内进行称重并在匀浆器中进一步匀质处理；④浆体逐级经过直径2浆体逐级经过直径2．0 mm、1．0 mm、