in介导的重组人ARDBD的原核可溶性表达、纯化和活性鉴定.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（４）：７１１ Ｉｎｔｅｉｎ介导的重组人ＡＲＤＢＤ的原核可溶性表达、 纯化及活性鉴定 １ １ ２，３ 姚广新 　张怡轩 　胡双纲 （１沈阳药科大学　 沈阳　１１００１６　２中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所　上海　２０００３１） （３分子生物学国家重点实验室　上海　２０００３１） 摘要　雄激素受体通过ＤＮＡ结合域与效应元件结合发挥作用，在以往的研究中多采用与 ＧＳＴ或 ＰｒｏｔｅｉｎＡ融合的方式对雄激素受体的ＤＮＡ结合域（ＡＲＤＢＤ）进行重组表达，但获得无融合标签 的纯ＡＲＤＢＤ的操作非常繁琐。现借助内含肽介导的自剪切作用经一步亲和层析得到纯度较高 的无融合标签的ＡＲＤＢＤ，以利于对其性质和功能的研究。通过 ＰＣＲ方法扩增了编码人雄激素 受体５２０～６４４位氨基酸的核苷酸序列，将该序列克隆入 ｐＴＷＩＮ１融合表达载体，转化大肠杆菌 ＢＬ２