兰州大学细胞大实验动物细胞染色体制备.pptVIP

HeLa细胞染色体的制备与观察 对染色体进行分析，是染色体病进行确诊的最常用和最有效的手段。例如羊水细胞染色体分析是产前诊断胎儿染色体病的常规方法。同时，在细胞培养过程中常常需要检查染色体是否受到损伤，数目是否发生改变，以保证长期培养的细胞的稳定性。 在染色体研究的历史中，有三大关键技术，一是秋水仙素的应用；二是低渗技术，有利于染色体展开；三是植物凝集素（PHA）的应用，PHA可以使淋巴细胞转化成淋巴母细胞，重新进入分裂。这些技术的出现，建立了普遍采用培养外周血细胞来制备染色体标本的方法，成为研究人与哺乳动物染色体的主要技术。 实验目的： 掌握体外培养的肿瘤细胞染色体标本的制备方法。 观察染色体特征和数目。 实验流程： 细胞培养：HeLa细胞传代后培养68-72小时； 中期阻断：用5#针头滴加10μg/ml秋水仙素2滴每瓶细胞； 细胞收集：4小时后收集中期细胞于离心管中（5ml/组）1500转/分钟离心8分钟，弃上清； 低渗：加入0.4％KCl 3-4ml，37℃低渗20分钟，滴加卡诺固定液1-2滴，混匀离心（同上），弃上清； 固定：加入固定液3-4ml混匀，室温20分钟后离心弃上清； 悬浮：加入固定液0.5ml，悬浮细胞； 制片：冰片上滴悬液2滴/片，立即烤片； 染色：Giemsa染色15分钟； 镜检：观察分散染色体长短和数目，寻找微核。 * * 教学安排： 实验时间为3.5-4