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免疫荧光组织化学技术 一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述…………………………………………………… 二、免疫荧光组织化学的原理………………………………………………………………… （一）直接方法…………………………………………………………………………… 检查抗原方法…………………………………………………………………… 检查抗体方法…………………………………………………………………… （二）间接方法…………………………………………………………………………… 1．检查抗体(夹心法)方法…………………………………………………………… 2．检查抗体方法 …………………………………………………………………… 3．检查抗原法 ……………………………………………………………………… （三）补体法……………………………………………………………………………… 1．直接检查组织内免疫复合物方法……………………………………………… 2．间接检查组织内抗原方法……………………………………………………… （四）双重免疫荧光组织化学标记方法………………………………………………… （五）对照试验…………………………………………………………………………… 直接方法 ………………………………………………………………………… 间接方法 ………………………………………………………………………… 补体方法 ………………………………………………………………………… 三、荧光抗体的制备……………………………………………………………………………… （一）荧光素 ……………………………………………………………………………… 异硫氰酸荧光素 ………………………………………………………………… 四甲基异硫氰酸罗达明 ………………………………………………………… 得克萨斯红(Texas red)…………………………………………………………… 4．其它荧光素………………………………………………………………………… （二）荧光素标记抗体的方法 …………………………………………………………… 1．FITC标记抗体的方法…………………………………………………………… 2．四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法…………………………………………… 3．藻红蛋白标记抗体方法…………………………………………………………… 4．蓝色荧光素标记抗体方法………………………………………………………… （三）荧光抗体的质量控制 ……………………………………………………………… 1．染色特异性和敏感性的测定方法………………………………………………… 2．F/P比值的测定方法……………………………………………………………… 3．荧光抗体的保存…………………………………………………………………… 四、免疫荧光组织化学染色方法……………………………………………………………… （一）荧光抗体染色方法………………………………………………………………… 1．直接方法…………………………………………………………………………… 2．间接方法(双层法) ……………………………………………………………… 3．间接方法 (夹心法) ……………………………………………………………… 4．补体方法…………………………………………………………………………… 5．膜抗原荧光抗体染色方法……………………………………………………… 6．双重染色方法……………………………………………………………………… 7．荧光抗体再染色方法……………………………………………………………… （二）荧光抗原染色方法………………………………………………………………… 五、荧光显微镜检查方法……………………………………………………………………… （一）荧光和荧光显微镜………………………………………………………………… （二）荧光显微镜标本制作要求………………………………………………………… 1．载玻片…………………………………………………………………………… 2．盖玻片…………………………………………………………………………… 3．标本………………………………………………………………………………… 4．封裱剂……………………………………………………………………………… 5．镜油………………………………………………………………………………… （三）使用荧光显微镜注意事项………………………………………………………… （四）荧光图像的记录方法……………………………………………………………… 六、非特异性染色的消除方法……………………………………………