植物钙调磷酸酶(CaN)试剂盒使用说明书.docVIP

植物 目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中含量。 实验原理 植物钙调磷酸酶试剂盒应用双抗体夹心法测定中植物水平。用纯化的植物抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗原，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品植物浓度。 试剂盒成份 96孔配置 48孔配置 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 塑料膜板盖 1块 半块 标准品：400u/l 1瓶（1.0l） 1瓶（0.5l） 空白对照 1瓶（1.0l） 1瓶（0.5l） 标准品稀释缓冲液 1瓶（8.0l） 1瓶（4.0l） 生物素标记的抗BALP抗体 1瓶（8.0l） 1瓶（4.0l） 亲和链酶素-HRP 1瓶（12l） 1瓶（5l） 洗涤缓冲液 1瓶（20l） 1瓶（10l） 底物A 1瓶（6.0l） 1瓶（3.0l） 底物B 1瓶（6.0l） 1瓶（3.0l） 终止液 1瓶（6.0l） 1瓶（3.0l） ?自备材料： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法：? 1、 ×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。 5、 保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。? 植物钙调磷酸酶试剂盒操作注意事项：? ● 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 ● 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 ● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 ● 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 ● 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 ● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 植物钙调磷酸酶试剂盒操作步骤：? 1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。 4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。 8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 在450nm波长处测定各孔的OD值。 试剂盒性能： ? 1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性：不与其它细胞因子反应。 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。 试剂的准备：? 1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 400 u/l （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul 200 u/l （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 100 u/l （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 5