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电泳缓冲液
电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。不过,一旦略呈黄色,则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理,并用Whatman 1号滤纸过滤2次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液 使用液 浓贮存液(每升) Tris-乙酸(TAE) 1×:0.04mol/L Tris-乙酸 50×:242g Tris碱 0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸(TPE) 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris碱 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸(1.679g/ml) 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸(TBE)a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 5×:54g Tris碱 0.001mol/L EDTA 27.5硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris 250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸(电泳级)(pH8.3) 0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级) 说明:tbe溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉淀后则予以废弃。以片都以1×tbe作为使用液(即1:5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小, 故通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1×tbe以提供足够的缓冲容量。碱性电泳缓冲液应现用现配。tris-甘氨酸缓冲液用sds聚丙烯酰胺凝胶电泳。2×sds凝胶加样缓冲液:100mmol/l tris·hcl(6.8)200mmol/l二硫苏糖醇(dtt)4%sds(电泳级)0.2%溴酚蓝20%甘油不含dtt的2×sds凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取1mol/l贮存液现加于上述缓冲液中。电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水?? 242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L??5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水?? 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L??染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4贮存。凝胶上样液(gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水?? 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到10ml??6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水?? 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g
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