实验2-DNA的粗提取与鉴定s.pptVIP

实验2 DNA的粗提取与鉴定 实验原理 1. 研磨液中的变性剂可使细胞破裂，释放DNA。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 以菜花为实验材料进行DNA的粗提取 1、课前准备 将新鲜菜花和体积分数为95％的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24h。 2、提取DNA的具体步骤 ⑴.取材：称取5-10g菜花，去梗取花，切碎。 ⑵.研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入2-4mL研磨液，充分研磨10min。 研磨液的配制方法如下：将10.1g Tris加入到50mL蒸馏水中，使其溶解，然后，用2moL/L的HCl溶液调节pH至8.0，再加入8.76g NaCl 、37.2g EDTA 、20gSDS。待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL Tris/HCl:提供缓冲体系，DNA在这一体系中呈稳定态（Tris为三羟甲基氨基甲烷） EDTA（乙二胺四乙酸二钠）：是DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA SDS（十二烷基磺酸钠）：可以使蛋白质变性，与DNA分离 ⑶.过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min的转速，离心2～5 min，取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液 ⑷.沉淀：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上 （5）. DNA的鉴定 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液2ml 其中一支试管中加入DNA丝状物 各加入二苯胺试剂2ml 混匀后，置于沸水浴中加热5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 思考题： 1、研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 2、研磨液中可能含有哪些成分？ 3、研磨液中SDS和食盐的作用分别是什么？ DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； * 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 * DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； * 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 *