丝裂霉素C抑制人结膜囊成纤维细胞生长及增殖论文.docVIP

　　丝裂霉素C抑制人结膜囊成纤维细胞生长及增殖论文 .freelin后，可使成纤维细胞MTT比色A570nm 值7d内无显著变化（P 0.05），3 H-TdR掺入实验CPM第1日较对照组降低了72.5%，至第7日时仍低于对照组86.2%（P 0.01）.细胞增殖周期中，MMC组S期细胞的百分比明显低于对照组. 结论 临床使用剂量MMC可使结膜囊成纤维细胞增殖能力下降，处于增殖抑制状态，而不引起明显的细胞死亡. Keyitomycin C;human Tenon’s capsule fibroblast;cell proliferation;cell culture Abstract:AIM To investigate the effects of mitomycin C（MMC）on the groan Tenon’s capsule fibroblast.METHODS The cultured human Tenon’s fibroblasts easured by MTT assay，and3 H-thymi-dine（3 H-TdR）incorporation and cell cycle ined by floetry.RESULTS After the fibroblests g mL-1 ）for5minutes.freeluch loan Tenon’s fibroblasts rather than cause the cell death. 0 引言 滤过道处结膜下的瘢痕化是青光眼滤过手术后眼压不能控制导致手术失败的最主要原因［1］ ，手术中局部给予丝裂霉素C（MMC）已广泛地应用于临床.此方法被证明可以明显提高滤过手术的成功率并可维持较长时间，但MMC在此使用方法下的抗瘢痕形成的确切机制仍并不十分清楚［2，3］ .我们观察了MMC对人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的影响，报告如下. 1 材料和方法 1.1 材料 MMC为日本Kyoa公司产品，小牛血清、胰蛋白酶/EDTA为美国Gibco公司产品，3 H-TdR为中国原子能研究所产品. 1.2 方法 ①人结膜囊成纤维细胞的培养:人结膜囊组织取自美国华盛顿大学医学院眼科及本院眼科白内障手术患者，年龄50～70岁，白种人3例，黄种人2例.供体间未观察到明显差异（另文报告），结果一并处理.所有供者以往均无眼部手术史，近3mo来局部未使用抗青光眼药物及其他药物.培养后选第3～6代细胞用于实验.②MMC处理:将已铺满的成纤维细胞（96孔板）每孔加入0.4g L-1 MMC100μL，5min后，DMEM洗涤3次，加入含20mL L-1 小牛血清的DMEM，继续培养.③MTT比色实验:MMC处理后1，3，5和7d，每孔加入5g L-1 MTT20μL，继续培养4h后，弃去培养液，加入DMSO150μL/孔.微型振荡器上振荡15min，在570nm波长测定吸光度（A），对照组DEME替换MMC，余步骤相同，每组设4个复孔，实验重复3次.细胞生长抑制率=（1-实验组A570nm /对照组A 570nm ）×100.④3 H-TdR掺入实验:MMC处理及分组同MTT比色实验，每孔加入18.5kBq3 H-TdR，继续培养12h，收集细胞于F4玻璃纤维滤纸.自动液闪计数仪测定样品的放射性cpm值，每组设4个复孔.实验重复5次.细胞增殖抑制率=（1-实验组cpm值/对照组cpm值）×100.⑤流式细胞仪测定细胞增殖周期:经MMC处理后的成纤维细胞，用不含血清的DMEM继续培养24h，消化、离心、固定后，调整细胞浓度为（5～10）×108 L-1 ，加入PI300μL染色30min，350目筛网过滤，流式细胞仪上测定细胞周期. 2 结果 2.1 MTT比色实验 与对照组相比，MMC组1d的生长抑制率仅为33.1%，但7d时已为80.3%，MCC组4时间点间A 570nm 无明显差异（P 0.05，Tab1）. 表1 MMC作用5min对成纤维细胞生长的影响 略 2.2 3 H┐TdR掺入实验 MMC组1d增殖抑制率即达到72.5%，7d为86.2%，MMC组各时间点cpm值与对照组间均有显著差异（P 0.01，Tab2）. 表2 MMC作用5min对成纤维细胞增殖的影响 略 2.3 流式细胞仪测定结果 MMC处理组G1 期较 对照组增加，而S期及G期则减小.处于G1 ，S和G2 期的细胞百分比，在对照组分别为87.5%，4.6%和7.9%;而MMC处理组分别为94.9%，1.9%和3.2%. 3 讨论 成纤维细胞是组织修复过程中最主要的细胞成分之一，局部成纤维细胞