基因表达分析术.pptVIP

RPA基本程序： ●待测RNA的分离 ●体外转录标记RNA探针 ●待测RNA与探针RNA进行液相杂交 ● RNA酶消化 ●不同大小杂交片段凝胶电泳分离 RPA比Northern Blot的优势： 1.过量的探针与目的基因的杂交在液相环境完成，反应更加完全 2.RPA比Northern Blot灵敏15－150倍，适合检测各种表达水平之基因 3.RPA通量高，同时检测多个基因，可评价他们在同一情况下的差异表达 4.一次RPA就能完成10 多次Northern Blot的工作，加快研究速度 原位杂交技术主要步骤： 材料处理及细胞样品的固定； 样品的制备和预处理； 探针的制备和预杂交； 探针及样品的变性； 杂交温育； 检测杂交信号，进行结果分析。 PCR技术原理 实验仪器 实验结果 Target Amplification 常规PCR方法的局限性分析： 无法对起始模板准确定量,只能对终产物进行分析 必须在扩增后用电泳方法分析,费时费力而且EB有毒 无法对扩增反应实时检测 2、实时荧光定量PCR （real-time PCR） 非特异性的嵌入荧光染料 （Non-specific DNA binding dyes） SYBR? Green I SYBR? Gold Ethidium Bromide DNA binding dyes 非特异性的嵌入荧光染